目的:通過(guò)建立小鼠肝臟缺血再灌注損傷（HIRI）模型并檢測(cè)細(xì)胞焦亡和炎癥相關(guān)指標(biāo)的表達(dá)情況,探索細(xì)胞焦亡是否參與了小鼠HIRI的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。方法:（1）建立70%小鼠肝臟缺血再灌注損傷模型:SPF級(jí)C57BL/6雄性小鼠24只,8¹0周齡,體重18²2 g,隨機(jī)分為假手術(shù)對(duì)照組（Sham組,n=6）、再灌注6 h組（HIR 6 h組,n=6）、再灌注12h組（HIR 12 h組,n=6）、再灌注24 h組（HIR 24 h組,n=6）。使用“結(jié)扎法”結(jié)扎肝中葉和肝左葉的共干（顯微手術(shù)器械和8-0絲線結(jié)扎肝中葉和肝左葉的共干）,阻斷兩肝葉血流90 min后再開(kāi)放,分別于上述各時(shí)間點(diǎn)處死小鼠采集血液和肝臟組織標(biāo)本;（2）血液標(biāo)本提取血清后使用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）以及乳酸脫氫酶（LDH）的表達(dá)水平,選擇肝功能損傷最嚴(yán)重的一組實(shí)驗(yàn)小鼠繼續(xù)進(jìn)行后續(xù)研究;（3）HE染色觀察假手術(shù)對(duì)照組和所選實(shí)驗(yàn)組肝臟組織病理變化;（4）實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-PCR）檢測(cè)兩組肝組織中細(xì)胞焦亡和炎癥相關(guān)mRNA表達(dá)情況;（5）蛋白... 

【文章來(lái)源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

小鼠HIRI模型建立情況

灌注后 12 h 后達(dá)到高峰，分別為（11529.6±1871.9）U/L、（13188.0±3209.1）U/L 和（34502.1±7939.6）U/L，與對(duì)照組相比較，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。隨著時(shí)間的推移，各項(xiàng)指標(biāo)逐漸下降。上述結(jié)果表明，在小鼠缺血再灌注 12 h 后，肝組織受損最嚴(yán)重，隨后肝功能漸漸恢復(fù)。因此，在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中選擇 HIR 12 h 組繼續(xù)進(jìn)行研究。如表 3-1 和圖 3-2。表 3-1 血清 ALT、AST 及 LDH 表達(dá)水平組別 ALT（U/L） AST（U/L） LDH（U/L）Sham 組 44.0±12.5 147.0±8.7 523.7±56.4HIR 6 h 組 368.7±129.4* 615.6±57.0* 2324.1±316.3*HIR 12 h 組 11529.6±1871.9* 13188.0±3209.1* 34502.1±7939.6*HIR 24 h 組 2217.3±713.6* 1365.0±433.8* 1850.0±356.8*注：*表示與 Sham 組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

HE×40 HE×100 HE×400圖 3-3 Sham 組肝組織病理學(xué)改變HE×40 HE×100 HE×400圖 3-4 HIR 12 h 組肝組織病理學(xué)改變3.4 細(xì)胞焦亡和炎癥相關(guān)基因表達(dá)情況為了研究小鼠 HIRI 后肝臟組織細(xì)胞焦亡和炎癥相關(guān)基因的表達(dá)情況，本研究提取了 Sham 組和 HIR 12 h 組小鼠肝組織總 RNA，借助實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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