細胞焦亡在小鼠肝臟缺血再灌注損傷中的作用研究
發(fā)布時間：2021-08-21 11:57
目的:通過建立小鼠肝臟缺血再灌注損傷（HIRI）模型并檢測細胞焦亡和炎癥相關(guān)指標的表達情況,探索細胞焦亡是否參與了小鼠HIRI的發(fā)生發(fā)展過程。方法:（1）建立70%小鼠肝臟缺血再灌注損傷模型:SPF級C57BL/6雄性小鼠24只,810周齡,體重1822 g,隨機分為假手術(shù)對照組（Sham組,n=6）、再灌注6 h組（HIR 6 h組,n=6）、再灌注12h組（HIR 12 h組,n=6）、再灌注24 h組（HIR 24 h組,n=6）。使用“結(jié)扎法”結(jié)扎肝中葉和肝左葉的共干（顯微手術(shù)器械和8-0絲線結(jié)扎肝中葉和肝左葉的共干）,阻斷兩肝葉血流90 min后再開放,分別于上述各時間點處死小鼠采集血液和肝臟組織標本;（2）血液標本提取血清后使用全自動生化儀檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）以及乳酸脫氫酶（LDH）的表達水平,選擇肝功能損傷最嚴重的一組實驗小鼠繼續(xù)進行后續(xù)研究;（3）HE染色觀察假手術(shù)對照組和所選實驗組肝臟組織病理變化;（4）實時熒光定量PCR（RT-PCR）檢測兩組肝組織中細胞焦亡和炎癥相關(guān)mRNA表達情況;（5）蛋白...
【文章來源】：蘭州大學甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：69 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
小鼠HIRI模型建立情況
灌注后 12 h 后達到高峰，分別為（11529.6±1871.9）U/L、（13188.0±3209.1）U/L 和（34502.1±7939.6）U/L，與對照組相比較，差異具有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。隨著時間的推移，各項指標逐漸下降。上述結(jié)果表明，在小鼠缺血再灌注 12 h 后，肝組織受損最嚴重，隨后肝功能漸漸恢復。因此，在后續(xù)的實驗中選擇 HIR 12 h 組繼續(xù)進行研究。如表 3-1 和圖 3-2。表 3-1 血清 ALT、AST 及 LDH 表達水平組別 ALT（U/L） AST（U/L） LDH（U/L）Sham 組 44.0±12.5 147.0±8.7 523.7±56.4HIR 6 h 組 368.7±129.4* 615.6±57.0* 2324.1±316.3*HIR 12 h 組 11529.6±1871.9* 13188.0±3209.1* 34502.1±7939.6*HIR 24 h 組 2217.3±713.6* 1365.0±433.8* 1850.0±356.8*注：*表示與 Sham 組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
HE×40 HE×100 HE×400圖 3-3 Sham 組肝組織病理學改變HE×40 HE×100 HE×400圖 3-4 HIR 12 h 組肝組織病理學改變3.4 細胞焦亡和炎癥相關(guān)基因表達情況為了研究小鼠 HIRI 后肝臟組織細胞焦亡和炎癥相關(guān)基因的表達情況，本研究提取了 Sham 組和 HIR 12 h 組小鼠肝組織總 RNA，借助實時熒光定量 PCR 技
【參考文獻】：
期刊論文
[1]細胞焦亡激活機制及相關(guān)疾病研究進展[J]. 祁會麗,姚麗芬. 中華實用診斷與治療雜志. 2016(05)
[2]AIM2炎癥小體在感受細胞漿DNA中的作用[J]. 宋啟斌,褚玉新,胡偉國. 中國免疫學雜志. 2015(03)
[3]MCP-1在炎性反應中的研究進展[J]. 毛志敏,周如丹,趙學凌,王兵. 醫(yī)學綜述. 2013(06)
[4]肝缺血再灌注損傷的機制及其預防[J]. 何劍戈,任愛紅,施懿誠,侯小漫,趙義鴿. 河南科技大學學報(醫(yī)學版). 2012(03)
[5]CXCR1、CXCR2及其配體的結(jié)構(gòu)和功能[J]. 畢惠娟,王健. 免疫學雜志. 2010(12)
[6]肝臟缺血再灌注損傷的發(fā)生機制研究進展[J]. 王冰,汪根樹,陳規(guī)劃. 器官移植. 2010(05)
[7]白介素-1β介導缺血再灌注損傷后肺損傷[J]. 畢寧康,岳屹囡,蔣紅雨,張力. 中華婦幼臨床醫(yī)學雜志. 2009(01)
[8]褪黑素對大鼠肝缺血再灌注損傷的保護作用[J]. 甄允方,孫慶林,顧志成,汪健. 蘇州大學學報(醫(yī)學版). 2007(01)
[9]凋亡相關(guān)斑點樣蛋白ASC的研究進展[J]. 胡艷玲,劉佳佳. 國際免疫學雜志. 2008 (03)
[10]小鼠肝臟部分缺血再灌注損傷模型的建立[J]. 麻勇,汪大偉,劉連新,王建奇,王繼洲,潘華洋,潘尚哈,姜洪池. 中華消化外科雜志. 2013 (09)
博士論文
[1]NALP3炎癥小體參與小鼠肝臟缺血再灌注損傷的作用及其機制[D]. 朱平.華中科技大學 2011
碩士論文
[1]肝缺血再灌注損傷中奧曲肽對HMGB1、CHOP、caspase11的影響[D]. 肖衛(wèi)強.南華大學 2017
本文編號：3355554
【文章來源】：蘭州大學甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：69 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
小鼠HIRI模型建立情況
灌注后 12 h 后達到高峰，分別為（11529.6±1871.9）U/L、（13188.0±3209.1）U/L 和（34502.1±7939.6）U/L，與對照組相比較，差異具有顯著統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。隨著時間的推移，各項指標逐漸下降。上述結(jié)果表明，在小鼠缺血再灌注 12 h 后，肝組織受損最嚴重，隨后肝功能漸漸恢復。因此，在后續(xù)的實驗中選擇 HIR 12 h 組繼續(xù)進行研究。如表 3-1 和圖 3-2。表 3-1 血清 ALT、AST 及 LDH 表達水平組別 ALT（U/L） AST（U/L） LDH（U/L）Sham 組 44.0±12.5 147.0±8.7 523.7±56.4HIR 6 h 組 368.7±129.4* 615.6±57.0* 2324.1±316.3*HIR 12 h 組 11529.6±1871.9* 13188.0±3209.1* 34502.1±7939.6*HIR 24 h 組 2217.3±713.6* 1365.0±433.8* 1850.0±356.8*注：*表示與 Sham 組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
HE×40 HE×100 HE×400圖 3-3 Sham 組肝組織病理學改變HE×40 HE×100 HE×400圖 3-4 HIR 12 h 組肝組織病理學改變3.4 細胞焦亡和炎癥相關(guān)基因表達情況為了研究小鼠 HIRI 后肝臟組織細胞焦亡和炎癥相關(guān)基因的表達情況，本研究提取了 Sham 組和 HIR 12 h 組小鼠肝組織總 RNA，借助實時熒光定量 PCR 技
【參考文獻】：
期刊論文
[1]細胞焦亡激活機制及相關(guān)疾病研究進展[J]. 祁會麗,姚麗芬. 中華實用診斷與治療雜志. 2016(05)
[2]AIM2炎癥小體在感受細胞漿DNA中的作用[J]. 宋啟斌,褚玉新,胡偉國. 中國免疫學雜志. 2015(03)
[3]MCP-1在炎性反應中的研究進展[J]. 毛志敏,周如丹,趙學凌,王兵. 醫(yī)學綜述. 2013(06)
[4]肝缺血再灌注損傷的機制及其預防[J]. 何劍戈,任愛紅,施懿誠,侯小漫,趙義鴿. 河南科技大學學報(醫(yī)學版). 2012(03)
[5]CXCR1、CXCR2及其配體的結(jié)構(gòu)和功能[J]. 畢惠娟,王健. 免疫學雜志. 2010(12)
[6]肝臟缺血再灌注損傷的發(fā)生機制研究進展[J]. 王冰,汪根樹,陳規(guī)劃. 器官移植. 2010(05)
[7]白介素-1β介導缺血再灌注損傷后肺損傷[J]. 畢寧康,岳屹囡,蔣紅雨,張力. 中華婦幼臨床醫(yī)學雜志. 2009(01)
[8]褪黑素對大鼠肝缺血再灌注損傷的保護作用[J]. 甄允方,孫慶林,顧志成,汪健. 蘇州大學學報(醫(yī)學版). 2007(01)
[9]凋亡相關(guān)斑點樣蛋白ASC的研究進展[J]. 胡艷玲,劉佳佳. 國際免疫學雜志. 2008 (03)
[10]小鼠肝臟部分缺血再灌注損傷模型的建立[J]. 麻勇,汪大偉,劉連新,王建奇,王繼洲,潘華洋,潘尚哈,姜洪池. 中華消化外科雜志. 2013 (09)
博士論文
[1]NALP3炎癥小體參與小鼠肝臟缺血再灌注損傷的作用及其機制[D]. 朱平.華中科技大學 2011
碩士論文
[1]肝缺血再灌注損傷中奧曲肽對HMGB1、CHOP、caspase11的影響[D]. 肖衛(wèi)強.南華大學 2017
本文編號：3355554
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