非酒精性脂肪性肝臟疾�。∟onalcoholic fatty liver disease,NAFLD）是由非酒精因素引起的一種慢性肝臟疾病,其主要特征是脂質(zhì)在肝臟中發(fā)生異常積累,并且出現(xiàn)多種組織學(xué)的病理變化,如肝臟組織的脂肪變,非酒精性脂肪性肝炎,肝臟纖維化,肝硬化甚至?xí)M(jìn)一步發(fā)展為肝癌。近年來許多關(guān)于NAFLD的研究發(fā)現(xiàn)II型糖尿病,高血脂,肥胖等背景與脂肪肝有很大程度上的聯(lián)系。同型半胱氨酸（Homocysteine,Hcy）是蛋氨酸在體內(nèi)由肝臟代謝所產(chǎn)生的具有多種生物學(xué)功能的含硫氨基酸。目前將血漿內(nèi)的Hcy含量過高（≥15μM）定義為高同型半胱氨酸血癥（Hyperhomocysteinemia,HHcy）。許多與代謝相關(guān)的疾病、心血管疾病和免疫性疾病的發(fā)生都與HHcy密切相關(guān)。臨床研究顯示,血漿中Hcy的含量水平與NAFLD的發(fā)生呈正相關(guān)關(guān)系�？扇苄员硌趸锼饷福⊿oluble Epoxide Hydrolase,sEH）是花生四烯酸（Arachidonic acid,AA）細(xì)胞色素P450代謝通路中的關(guān)鍵酶,可將表氧-二十碳三烯酸（Epoxyeicosatrienoic aci... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

HMD喂養(yǎng)增加了小鼠肝臟脂質(zhì)沉積取HMD喂養(yǎng)和正常飲食喂養(yǎng)小鼠肝臟，進(jìn)行冰凍切片

圖 2. HMD 喂養(yǎng)小鼠肝臟中 sEH 的表達(dá)和活性提取不同飲食喂養(yǎng)小鼠肝臟組織的 mRNA 和蛋白, 檢測(cè)肝臟組織 sEH 的表達(dá)以及活。(A) Western blot 檢測(cè) sEH 蛋白表達(dá)情況；(B) qRT-PCR 檢測(cè) sEH mRNA 表達(dá)情況 LC/MS-MS 質(zhì)譜檢測(cè) EETs 與 DHETs 的比值表示 sEH 的相對(duì)活性；(Means±SEM, *p5, Means±SEM,**p <0.01, n≥6)2 HHcy 通過增加 sEH 活性降低了肝臟內(nèi) EET 的水平sEH 最主要的生物學(xué)功能是將花生四烯酸通過細(xì)胞色素 P450 通路代謝的 EET 同分異構(gòu)體（5,6-；8,9-；11,12- 和 14,15-EET）代謝為無活性的代謝，通過上述結(jié)果可知，HHcy 上調(diào)了肝臟組織 sEH 的表達(dá)。進(jìn)一步的檢測(cè)結(jié)現(xiàn) HHcy 組小鼠肝臟 sEH 的活性亦明顯增加。為了明確 sEH 活性的改變是響了肝臟內(nèi) EET 的水平，我們利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC/MS-MS）檢臟組織中花生四烯酸代謝產(chǎn)物 EET 的含量，結(jié)果顯示 HHcy 小鼠肝臟組,12-EET 的含量顯著降低，其他三種 EET 含量無明顯變化。在機(jī)體內(nèi)，EET

22圖 3. 肝臟組織中 EET 的代謝及含量(A) 花生四烯酸的細(xì)胞色素 P450 途徑代謝示意圖 ; (B) 液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜法(LC/MS-MS)檢測(cè)肝臟組織中花生四烯酸代謝產(chǎn)物 EET 的含量; (C)檢測(cè)參與 EET 合成代謝關(guān)鍵酶的表達(dá)；(Means±SEM, *p < 0.05, n≥6)1.3 Hcy 通過增加 sEH 的活性促進(jìn)了肝細(xì)胞的脂質(zhì)沉積上述在體實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在 HHcy 引起的肝臟脂肪變性中，sEH 蛋白有著重要的作用。那么Hcy與肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積和sEH表達(dá)和活性之間是否存在聯(lián)系? 分離小鼠原代肝細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁 6h 后給予 Hcy（100μM）處理，對(duì)肝細(xì)胞進(jìn)行油紅 O 染色，發(fā)現(xiàn) Hcy 處理組中肝細(xì)胞的脂滴聚集相對(duì)于對(duì)照組明顯增多。mRNA 和蛋白檢測(cè)結(jié)果顯示 Hcy 增加了肝細(xì)胞 sEH 的表達(dá)和活性。進(jìn)一步

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3344110