目的探討血小板反應(yīng)蛋白1（TSP-1）對TGF-β1活性的調(diào)控在人間皮細胞間皮間葉轉(zhuǎn)化（MMT）中的作用及其機制。方法體外培養(yǎng)人間皮細胞株（Met-5A細胞）,與無血清培養(yǎng)基組（對照組）比較,測定外源性TSP-1刺激下（以5ng/mL的TSP-1刺激為TSP-1小劑量組,以10ng/mL的TSP-1刺激為TSP-1大劑量組）Met-5A細胞中TGF-β1的表達和活性,Smad通路活化,以及MMT標志因子纖維連接蛋白（FN）、人Ⅲ型膠原蛋白（CollⅢ）、α平滑肌肌動蛋白（α-SMA）、Snail的表達。同時觀察5ng/mL的TSP-1和10\mg/mL的TGF-β1中和抗體刺激下（中和組）Met-5A細胞中Smad通路活化和MMT發(fā)生的變化。結(jié)果 TSP-1小劑量組和TSP-1大劑量組對Met-5A細胞中TGF-β1表達量和活性的上調(diào)作用均呈時間依賴性（P值均<0.05）,但兩組間同時間點的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P值均>0.05）。故之后的實驗均應(yīng)用5ng/mL的TSP-1刺激細胞。TSP-1小劑量組在刺激24、48、72h時Met-5A細胞中FN、CollⅢ、Snail和α... 

【文章來源】：上海醫(yī)學(xué). 2015,38(07)北大核心CSCD

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圖１５ｎｇ／ｍＬＴＳＰ－１刺激不同時間Ｍｅｔ－５Ａ細胞中１：刺激０ｍｉｎ時；２：刺激５ｍｉｎ時；３：刺激１０ｍｉｎ時；４：刺激３０ｍｉｎ時；５：刺激６０ｍｉｎ時；６：刺激１２０ｍｉｎ時

蛋白的相對表達量為１．００±０．００，ＴＳＰ－１小劑量組在刺激５、１０、３０、６０、１２０ｍｉｎ時Ｍｅｔ－５Ａ細胞中ｐ－Ｓｍａｄ２／３／Ｓｍａｄ２／３蛋白的相對表達量分別為１．０２±０．１６、１．７１±０．２０、２．０２±０．３１、２．９７±０．６５、５．７９±０．５３。１：刺激０ｍｉｎ時；２：刺激５ｍｉｎ時；３：刺激１０ｍｉｎ時；４：刺激３０ｍｉｎ時；５：刺激６０ｍｉｎ時；６：刺激１２０ｍｉｎ時圖１５ｎｇ／ｍＬＴＳＰ－１刺激不同時間Ｍｅｔ－５Ａ細胞中ｐ－Ｓｍａｄ２／３和Ｓｍａｄ２／３蛋白的變化ＴＳＰ－１小劑量組在刺激１０、３０、６０、１２０ｍｉｎ時Ｍｅｔ－５Ａ細胞中ｐ－Ｓｍａｄ２／３／Ｓｍａｄ２／３蛋白的相對表達量均顯著高于對照組刺激０ｈ時（Ｐ值均＜０．０５）。２．４ＴＧＦ－β１中和抗體對ＴＳＰ－１誘導(dǎo)的Ｍｅｔ－５Ａ細胞中Ｓｍａｄ通路活化和ＭＭＴ的影響免疫熒光檢測結(jié)果顯示，ＴＳＰ－１刺激Ｍｅｔ－５Ａ細胞可引起Ｓｍａｄ２／３磷酸化并向細胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移（圖２，見封底），提示Ｓｍａｄ通路活化。應(yīng)用中和抗體阻斷ＴＧＦ－β１與受體結(jié)合，可部分下調(diào)ＴＳＰ－１引起的Ｓｍａｄ通路活化，并降低ＴＳＰ－１引起的ＭＭＴ標志因子ｍＲＮＡ表達上調(diào)（圖２，見封底），提示ＴＳＰ－１通過活化ＴＧＦ－β１／Ｓｍａｄ通路導(dǎo)致ＭＭＴ的發(fā)生。ＴＳＰ－１小劑量組在刺激２４、４８、７２ｈ時Ｍｅｔ－５Ａ細胞中的Ｆ

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3311714