目的探討血小板反應(yīng)蛋白1（TSP-1）對(duì)TGF-β1活性的調(diào)控在人間皮細(xì)胞間皮間葉轉(zhuǎn)化（MMT）中的作用及其機(jī)制。方法體外培養(yǎng)人間皮細(xì)胞株（Met-5A細(xì)胞）,與無血清培養(yǎng)基組（對(duì)照組）比較,測(cè)定外源性TSP-1刺激下（以5ng/mL的TSP-1刺激為TSP-1小劑量組,以10ng/mL的TSP-1刺激為TSP-1大劑量組）Met-5A細(xì)胞中TGF-β1的表達(dá)和活性,Smad通路活化,以及MMT標(biāo)志因子纖維連接蛋白（FN）、人Ⅲ型膠原蛋白（CollⅢ）、α平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）、Snail的表達(dá)。同時(shí)觀察5ng/mL的TSP-1和10\mg/mL的TGF-β1中和抗體刺激下（中和組）Met-5A細(xì)胞中Smad通路活化和MMT發(fā)生的變化。結(jié)果 TSP-1小劑量組和TSP-1大劑量組對(duì)Met-5A細(xì)胞中TGF-β1表達(dá)量和活性的上調(diào)作用均呈時(shí)間依賴性（P值均<0.05）,但兩組間同時(shí)間點(diǎn)的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P值均>0.05）。故之后的實(shí)驗(yàn)均應(yīng)用5ng/mL的TSP-1刺激細(xì)胞。TSP-1小劑量組在刺激24、48、72h時(shí)Met-5A細(xì)胞中FN、CollⅢ、Snail和α... 

【文章來源】：上海醫(yī)學(xué). 2015,38(07)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

圖１５ｎｇ／ｍＬＴＳＰ－１刺激不同時(shí)間Ｍｅｔ－５Ａ細(xì)胞中１：刺激０ｍｉｎ時(shí)；２：刺激５ｍｉｎ時(shí)；３：刺激１０ｍｉｎ時(shí)；４：刺激３０ｍｉｎ時(shí)；５：刺激６０ｍｉｎ時(shí)；６：刺激１２０ｍｉｎ時(shí)

蛋白的相對(duì)表達(dá)量為１．００±０．００，ＴＳＰ－１小劑量組在刺激５、１０、３０、６０、１２０ｍｉｎ時(shí)Ｍｅｔ－５Ａ細(xì)胞中ｐ－Ｓｍａｄ２／３／Ｓｍａｄ２／３蛋白的相對(duì)表達(dá)量分別為１．０２±０．１６、１．７１±０．２０、２．０２±０．３１、２．９７±０．６５、５．７９±０．５３。１：刺激０ｍｉｎ時(shí)；２：刺激５ｍｉｎ時(shí)；３：刺激１０ｍｉｎ時(shí)；４：刺激３０ｍｉｎ時(shí)；５：刺激６０ｍｉｎ時(shí)；６：刺激１２０ｍｉｎ時(shí)圖１５ｎｇ／ｍＬＴＳＰ－１刺激不同時(shí)間Ｍｅｔ－５Ａ細(xì)胞中ｐ－Ｓｍａｄ２／３和Ｓｍａｄ２／３蛋白的變化ＴＳＰ－１小劑量組在刺激１０、３０、６０、１２０ｍｉｎ時(shí)Ｍｅｔ－５Ａ細(xì)胞中ｐ－Ｓｍａｄ２／３／Ｓｍａｄ２／３蛋白的相對(duì)表達(dá)量均顯著高于對(duì)照組刺激０ｈ時(shí)（Ｐ值均＜０．０５）。２．４ＴＧＦ－β１中和抗體對(duì)ＴＳＰ－１誘導(dǎo)的Ｍｅｔ－５Ａ細(xì)胞中Ｓｍａｄ通路活化和ＭＭＴ的影響免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示，ＴＳＰ－１刺激Ｍｅｔ－５Ａ細(xì)胞可引起Ｓｍａｄ２／３磷酸化并向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移（圖２，見封底），提示Ｓｍａｄ通路活化。應(yīng)用中和抗體阻斷ＴＧＦ－β１與受體結(jié)合，可部分下調(diào)ＴＳＰ－１引起的Ｓｍａｄ通路活化，并降低ＴＳＰ－１引起的ＭＭＴ標(biāo)志因子ｍＲＮＡ表達(dá)上調(diào)（圖２，見封底），提示ＴＳＰ－１通過活化ＴＧＦ－β１／Ｓｍａｄ通路導(dǎo)致ＭＭＴ的發(fā)生。ＴＳＰ－１小劑量組在刺激２４、４８、７２ｈ時(shí)Ｍｅｔ－５Ａ細(xì)胞中的Ｆ

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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