目的:探討人臍帶間充質干細胞來源的外泌體（human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosomes,hucMSC-Ex）在氧化偶氮甲烷（Azoxymethane,AOM）與葡聚糖硫酸鈉（dextran sulfate sodium salt,DSS）聯(lián)合誘導的小鼠結腸炎惡性轉化中的作用,明確SUMO1介導的SUMOylation在hucMSC-Ex緩解小鼠結腸炎惡性轉化過程中的作用及機制。方法:1)hucMSC-Ex的分離鑒定:分離hucMSC,從hucMSC培養(yǎng)上清液中提取hucMSC-Ex,使用NanoSight、透射電鏡和western blot等技術進行鑒定。2)選取6周,20g左右的雄性BABL/C小鼠,隨機分為Normal組、AOM/DSS組、hucMSC-Ex組。除Normal組外,其余兩組采用AOM/DSS誘導小鼠結直腸癌模型,hucMSC-Ex組于造模第10天、24天、38天予以hucMSC-Ex尾靜脈注射治療,并于第70天處死所有小鼠。觀察小鼠體重、糞便性狀、結直腸大體觀,比較各組結直腸腫瘤成瘤率及個數(shù),... 

【文章來源】：江蘇大學江蘇省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

HucMSC-Ex的鑒定A.NanoSight納米顆粒跟蹤分析儀檢測hucMSC-Ex直徑大�。籅.透射電鏡觀察hucMSC-Ex

HucMSC-Ex調控SUMO1緩解小鼠結腸炎惡性轉化的機制研究20圖3.2HucMSC-Ex減輕AOM/DSS誘導的小鼠結直腸癌的惡性程度A.小鼠體重變化；B.小鼠DAI指數(shù)；C.小鼠生存曲線；D.小鼠結直腸大體觀；E.小鼠結直腸腫瘤觀；F.小鼠腫瘤計數(shù)，***P<0.001；G.小鼠結直腸H&E染色（標尺=100μm）；H.小鼠結直腸PCNA免疫組織化學染色（標尺=100μm）。Figure3.2EffectofhucMSC-ExonAOM/DSS-inducedcolorectalcancerinmiceA.Mousebodyweightchange;B.MouseDAIindex;C.Mousesurvivalcurve;D.Mousecolorectalgrossview;E.Mousecolorectaltumorview;F.Mousetumorcount,***P<0.001;G.MouseColorectalH&Estaining(scalebar=100μm);H.MousecolorectalPCNAimmunohistochemicalstaining(scalebar=100μm).3.4.討論外泌體是細胞內多囊泡體（multivesicularbody，MVB）與質膜融合之后釋放的細胞外囊泡。其膜上攜帶有大量蛋白、RNA、miRNA以及膽固醇、神經(jīng)酰胺、鞘磷脂和脂筏[108]。作為細胞間通訊的參與者，外泌體可攜帶生物活性分子轉移到受體細胞中，介導細胞與細胞間的通信。外泌體的功能一部分源于其衍生細胞。多項研究已經(jīng)證明MSC在組織再生中起重要作用，但由于移植物存活率低、免

HucMSC-Ex調控SUMO1緩解小鼠結腸炎惡性轉化的機制研究26（圖4.1A）。我們還發(fā)現(xiàn)在第7周AOM/DSS組小鼠已出現(xiàn)腫瘤，在第10周數(shù)量明顯上升，而hucMSC-Ex組僅在第10周出現(xiàn)少量腫瘤（圖4.1B）。我們統(tǒng)計了各組出現(xiàn)腫瘤的小鼠數(shù)量，發(fā)現(xiàn)在第10周hucMSC-Ex組較AOM/DSS組成瘤率稍低，而在第7周，僅AOM/DSS組出現(xiàn)腫瘤（圖4.1C）。H&E染色結果顯示AOM/DSS組小鼠腸絨毛結構嚴重破壞，hucMSC-Ex組小鼠結直腸組織結構完整性有所恢復（圖4.1D）。QRT-PCR顯示，AOM/DSS組促炎細胞因子（IL-1β、TNF-α、IL-6）高表達，而抑炎細胞因子（IL-10）低表達。HucMSC-Ex處理后明顯下調了促炎細胞因子的表達，而抑炎細胞因子的表達水平也有所上升（圖4.1E）。以上結果表明hucMSC-Ex可以緩解AOM/DSS誘導的小鼠結腸炎惡性轉化過程。圖4.1HucMSC-Ex緩解AOM/DSS誘導的小鼠結腸炎惡性轉化過程A.不同時間點小鼠結直腸大體觀；B.不同時間點小鼠腫瘤觀；C.小鼠腫瘤發(fā)生率；D.不同時間點小鼠結直腸組織H&E染色（標尺=100μm）；E.QRT-PCR檢測不同時間點小鼠結直腸炎癥因子表達情況，**P<0.01;***P<0.001。Figure4.1HucMSC-ExalleviatestheAOM/DSS-inducedmalignanttransformationofcolitisinmiceA.Grossviewofmousecolorectalatdifferenttimepoints;B.Viewofmousetumoratdifferenttimepoints;C.Mousetumorincidence;D.H&Estainingofmousecolorectaltissueatdifferenttimepoints(scale=100μm);E.QRT-PCRtodetecttheexpressionofcolorectalinflammatory

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Prognostic value of innate and adaptive immunity in colorectal cancer[J]. Fabio Grizzi,Paolo Bianchi,Alberto Malesci,Luigi Laghi.  World Journal of Gastroenterology. 2013(02)



本文編號：3299149