目的:探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源的外泌體（human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosomes,hucMSC-Ex）在氧化偶氮甲烷（Azoxymethane,AOM）與葡聚糖硫酸鈉（dextran sulfate sodium salt,DSS）聯(lián)合誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎惡性轉(zhuǎn)化中的作用,明確SUMO1介導(dǎo)的SUMOylation在hucMSC-Ex緩解小鼠結(jié)腸炎惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中的作用及機(jī)制。方法:1)hucMSC-Ex的分離鑒定:分離hucMSC,從hucMSC培養(yǎng)上清液中提取hucMSC-Ex,使用NanoSight、透射電鏡和western blot等技術(shù)進(jìn)行鑒定。2)選取6周,20g左右的雄性BABL/C小鼠,隨機(jī)分為Normal組、AOM/DSS組、hucMSC-Ex組。除Normal組外,其余兩組采用AOM/DSS誘導(dǎo)小鼠結(jié)直腸癌模型,hucMSC-Ex組于造模第10天、24天、38天予以hucMSC-Ex尾靜脈注射治療,并于第70天處死所有小鼠。觀察小鼠體重、糞便性狀、結(jié)直腸大體觀,比較各組結(jié)直腸腫瘤成瘤率及個(gè)數(shù),... 

【文章來(lái)源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

HucMSC-Ex的鑒定A.NanoSight納米顆粒跟蹤分析儀檢測(cè)hucMSC-Ex直徑大��；B.透射電鏡觀察hucMSC-Ex

HucMSC-Ex調(diào)控SUMO1緩解小鼠結(jié)腸炎惡性轉(zhuǎn)化的機(jī)制研究20圖3.2HucMSC-Ex減輕AOM/DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)直腸癌的惡性程度A.小鼠體重變化；B.小鼠DAI指數(shù)；C.小鼠生存曲線；D.小鼠結(jié)直腸大體觀；E.小鼠結(jié)直腸腫瘤觀；F.小鼠腫瘤計(jì)數(shù)，***P<0.001；G.小鼠結(jié)直腸H&E染色（標(biāo)尺=100μm）；H.小鼠結(jié)直腸PCNA免疫組織化學(xué)染色（標(biāo)尺=100μm）。Figure3.2EffectofhucMSC-ExonAOM/DSS-inducedcolorectalcancerinmiceA.Mousebodyweightchange;B.MouseDAIindex;C.Mousesurvivalcurve;D.Mousecolorectalgrossview;E.Mousecolorectaltumorview;F.Mousetumorcount,***P<0.001;G.MouseColorectalH&Estaining(scalebar=100μm);H.MousecolorectalPCNAimmunohistochemicalstaining(scalebar=100μm).3.4.討論外泌體是細(xì)胞內(nèi)多囊泡體（multivesicularbody，MVB）與質(zhì)膜融合之后釋放的細(xì)胞外囊泡。其膜上攜帶有大量蛋白、RNA、miRNA以及膽固醇、神經(jīng)酰胺、鞘磷脂和脂筏[108]。作為細(xì)胞間通訊的參與者，外泌體可攜帶生物活性分子轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中，介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間的通信。外泌體的功能一部分源于其衍生細(xì)胞。多項(xiàng)研究已經(jīng)證明MSC在組織再生中起重要作用，但由于移植物存活率低、免

HucMSC-Ex調(diào)控SUMO1緩解小鼠結(jié)腸炎惡性轉(zhuǎn)化的機(jī)制研究26（圖4.1A）。我們還發(fā)現(xiàn)在第7周AOM/DSS組小鼠已出現(xiàn)腫瘤，在第10周數(shù)量明顯上升，而hucMSC-Ex組僅在第10周出現(xiàn)少量腫瘤（圖4.1B）。我們統(tǒng)計(jì)了各組出現(xiàn)腫瘤的小鼠數(shù)量，發(fā)現(xiàn)在第10周hucMSC-Ex組較AOM/DSS組成瘤率稍低，而在第7周，僅AOM/DSS組出現(xiàn)腫瘤（圖4.1C）。H&E染色結(jié)果顯示AOM/DSS組小鼠腸絨毛結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，hucMSC-Ex組小鼠結(jié)直腸組織結(jié)構(gòu)完整性有所恢復(fù)（圖4.1D）。QRT-PCR顯示，AOM/DSS組促炎細(xì)胞因子（IL-1β、TNF-α、IL-6）高表達(dá)，而抑炎細(xì)胞因子（IL-10）低表達(dá)。HucMSC-Ex處理后明顯下調(diào)了促炎細(xì)胞因子的表達(dá)，而抑炎細(xì)胞因子的表達(dá)水平也有所上升（圖4.1E）。以上結(jié)果表明hucMSC-Ex可以緩解AOM/DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程。圖4.1HucMSC-Ex緩解AOM/DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程A.不同時(shí)間點(diǎn)小鼠結(jié)直腸大體觀；B.不同時(shí)間點(diǎn)小鼠腫瘤觀；C.小鼠腫瘤發(fā)生率；D.不同時(shí)間點(diǎn)小鼠結(jié)直腸組織H&E染色（標(biāo)尺=100μm）；E.QRT-PCR檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)小鼠結(jié)直腸炎癥因子表達(dá)情況，**P<0.01;***P<0.001。Figure4.1HucMSC-ExalleviatestheAOM/DSS-inducedmalignanttransformationofcolitisinmiceA.Grossviewofmousecolorectalatdifferenttimepoints;B.Viewofmousetumoratdifferenttimepoints;C.Mousetumorincidence;D.H&Estainingofmousecolorectaltissueatdifferenttimepoints(scale=100μm);E.QRT-PCRtodetecttheexpressionofcolorectalinflammatory

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Prognostic value of innate and adaptive immunity in colorectal cancer[J]. Fabio Grizzi,Paolo Bianchi,Alberto Malesci,Luigi Laghi.  World Journal of Gastroenterology. 2013(02)



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