研究背景與目的：肝炎的發(fā)生發(fā)展是一個復雜的病理過程,其中病理性免疫反應引發(fā)肝組織中眾多細胞因子和炎癥介質異常分泌發(fā)揮了關鍵作用。花生四烯酸經由5-脂氧合酶（5-lipoxygenase,5-LO）代謝通路激活的炎性終產物與各種肝損傷密切相關,但5-LO通路在刀豆蛋白A（Concanavalin A, Con A）誘導急性肝炎被激活的調控機制仍遠未闡明。本研究采用經典的Con A誘導小鼠T細胞介導的肝損傷,模擬人類自身免疫反應性肝炎。重點探索Con A誘發(fā)小鼠肝急性損傷始發(fā)階段,若干關鍵的細胞因子和炎癥介質產生的轉錄后調控機制,力圖為闡明免疫性肝炎急性期病理機制提供實驗依據。方法：雄性Balb/c小鼠隨機分為5組,每組6只。除溶劑對照組尾靜脈注射生理鹽水外,其他幾組動物均尾靜脈注射Con A （20mg/kg）,2h處死。對上述損傷肝組織進行microRNAs （miRNAs）表達譜檢測及qRT-PCR驗證,篩選出差異表達的miRNAs （變化>1.5倍,P<0.05）。通過對差異表達miRNAs的生物信息學預測和分析,推測存在潛在負向調控的“miRNA-靶蛋白”對,并采用肝... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】：63 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
前言
中文摘要
Abstract
縮略詞表
第一部分 Con A誘導肝損傷早期miRNAs表達譜特征及生物信息學分析
    引言
    1.1 儀器和試劑
        1.1.1 實驗動物
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器
    1.2 實驗方法
        1.2.1 實驗模型構建
        1.2.2 miRNA表達譜芯片檢測
        1.2.3 miRNA表達變化的qRT-PCR驗證
        1.2.4 miRNA靶基因的生物信息學預測和分析
    1.3 實驗結果
        1.3.1 miRNA芯片篩選和數據分析
        1.3.2 針對miRNAs設計qRT-PCR發(fā)夾結構引物
        1.3.3 miRNA表達水平的qRT-PCR驗證
        1.3.4 靶基因的預測和同源分析
    1.4 討論
    1.5 小結
第二部分 炎癥因子微環(huán)境中miR-674-5p對5-LO轉錄后調控
    引言
    2.1 儀器和試劑
        2.1.1 實驗細胞
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 常用溶液配制
        2.1.4 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 miRNA-674-5p類似物的轉染
        2.2.3 炎癥因子刺激后5-LO表達水平的檢測
            2.2.3.1 蛋白樣本收集
            2.2.3.2 蛋白濃度測定
            2.2.3.3 蛋白免疫印跡
            2.2.3.4 數據分析
    2.3 實驗結果
        2.3.1 Hepa1-6小鼠肝細胞中“miR-674-5p/5-LO”的負向調控
        2.3.2 HepG2人肝細胞中“miR-674-5p/5-LO”的負向調控
    2.4 討論
    2.5 小結
全文結論
論文創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
綜述
    參考文獻
作者簡歷及在學期間所獲得的科研成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Serum levels of microRNAs can specifically predict liver injury of chronic hepatitis B[J]. Hui Zhang, Qing-Ya Li, Zhi-Zhong Guo, Yan Guan, Jia Du, Yi-Yu Lu, Shi-Bing Su, Research Center for Traditional Chinese Medicine Complexity System, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China Yi-Yang Hu, Ping Liu, Institute of Liver Disease, Shanghai Shuguang Hospital, Shanghai 201203, China Shuang Huang, Department of Biochemistry and Molecular Biology, Georgia Health Sciences University, Augusta, GA 30912, United States.  World Journal of Gastroenterology. 2012(37)
[2]MicroRNA signatures in liver diseases[J]. Xian-Ming Chen, Department of Medical Microbiology and Immunology, Creighton University Medical Center, CrissⅡ Room 529, 2500 California Plaza, Omaha, NE 68178,United States.  World Journal of Gastroenterology. 2009(14)
[3]Enhanced expressions and activations of leukotriene C4synthesis enzymes in D-galactosamine/lipopolysaccharide-induced rat fulminant hepatic failure model[J]. Kui-Fen Ma, Hong-Yu Yang, Zhe Chen, Luo-Yang Qi, Dan-Yan Zhu, Yi-Jia Lou, Institute of Pharmacology & Toxicology and Biochemical Pharmaceutics, College of Pharmaceutical Sciences, Zhejiang University, Hangzhou 310058, Zhejiang Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2008(17)
[4]HBV整合引起HepG2細胞microRNA表達譜變化分析[J]. 韓俊峰,阮志華,張蓓,吳玉章.  第三軍醫(yī)大學學報. 2007(22)



本文編號：3274911