研究背景與目的：肝炎的發(fā)生發(fā)展是一個復(fù)雜的病理過程,其中病理性免疫反應(yīng)引發(fā)肝組織中眾多細胞因子和炎癥介質(zhì)異常分泌發(fā)揮了關(guān)鍵作用�；ㄉ南┧峤�(jīng)由5-脂氧合酶（5-lipoxygenase,5-LO）代謝通路激活的炎性終產(chǎn)物與各種肝損傷密切相關(guān),但5-LO通路在刀豆蛋白A（Concanavalin A, Con A）誘導(dǎo)急性肝炎被激活的調(diào)控機制仍遠未闡明。本研究采用經(jīng)典的Con A誘導(dǎo)小鼠T細胞介導(dǎo)的肝損傷,模擬人類自身免疫反應(yīng)性肝炎。重點探索Con A誘發(fā)小鼠肝急性損傷始發(fā)階段,若干關(guān)鍵的細胞因子和炎癥介質(zhì)產(chǎn)生的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機制,力圖為闡明免疫性肝炎急性期病理機制提供實驗依據(jù)。方法：雄性Balb/c小鼠隨機分為5組,每組6只。除溶劑對照組尾靜脈注射生理鹽水外,其他幾組動物均尾靜脈注射Con A （20mg/kg）,2h處死。對上述損傷肝組織進行microRNAs （miRNAs）表達譜檢測及qRT-PCR驗證,篩選出差異表達的miRNAs （變化>1.5倍,P<0.05）。通過對差異表達miRNAs的生物信息學(xué)預(yù)測和分析,推測存在潛在負向調(diào)控的“miRNA-靶蛋白”對,并采用肝... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
前言
中文摘要
Abstract
縮略詞表
第一部分 Con A誘導(dǎo)肝損傷早期miRNAs表達譜特征及生物信息學(xué)分析
    引言
    1.1 儀器和試劑
        1.1.1 實驗動物
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器
    1.2 實驗方法
        1.2.1 實驗?zāi)Ｐ蜆?gòu)建
        1.2.2 miRNA表達譜芯片檢測
        1.2.3 miRNA表達變化的qRT-PCR驗證
        1.2.4 miRNA靶基因的生物信息學(xué)預(yù)測和分析
    1.3 實驗結(jié)果
        1.3.1 miRNA芯片篩選和數(shù)據(jù)分析
        1.3.2 針對miRNAs設(shè)計qRT-PCR發(fā)夾結(jié)構(gòu)引物
        1.3.3 miRNA表達水平的qRT-PCR驗證
        1.3.4 靶基因的預(yù)測和同源分析
    1.4 討論
    1.5 小結(jié)
第二部分 炎癥因子微環(huán)境中miR-674-5p對5-LO轉(zhuǎn)錄后調(diào)控
    引言
    2.1 儀器和試劑
        2.1.1 實驗細胞
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 常用溶液配制
        2.1.4 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 miRNA-674-5p類似物的轉(zhuǎn)染
        2.2.3 炎癥因子刺激后5-LO表達水平的檢測
            2.2.3.1 蛋白樣本收集
            2.2.3.2 蛋白濃度測定
            2.2.3.3 蛋白免疫印跡
            2.2.3.4 數(shù)據(jù)分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 Hepa1-6小鼠肝細胞中“miR-674-5p/5-LO”的負向調(diào)控
        2.3.2 HepG2人肝細胞中“miR-674-5p/5-LO”的負向調(diào)控
    2.4 討論
    2.5 小結(jié)
全文結(jié)論
論文創(chuàng)新點
參考文獻
附錄
綜述
    參考文獻
作者簡歷及在學(xué)期間所獲得的科研成果


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Serum levels of microRNAs can specifically predict liver injury of chronic hepatitis B[J]. Hui Zhang, Qing-Ya Li, Zhi-Zhong Guo, Yan Guan, Jia Du, Yi-Yu Lu, Shi-Bing Su, Research Center for Traditional Chinese Medicine Complexity System, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China Yi-Yang Hu, Ping Liu, Institute of Liver Disease, Shanghai Shuguang Hospital, Shanghai 201203, China Shuang Huang, Department of Biochemistry and Molecular Biology, Georgia Health Sciences University, Augusta, GA 30912, United States.  World Journal of Gastroenterology. 2012(37)
[2]MicroRNA signatures in liver diseases[J]. Xian-Ming Chen, Department of Medical Microbiology and Immunology, Creighton University Medical Center, CrissⅡ Room 529, 2500 California Plaza, Omaha, NE 68178,United States.  World Journal of Gastroenterology. 2009(14)
[3]Enhanced expressions and activations of leukotriene C4synthesis enzymes in D-galactosamine/lipopolysaccharide-induced rat fulminant hepatic failure model[J]. Kui-Fen Ma, Hong-Yu Yang, Zhe Chen, Luo-Yang Qi, Dan-Yan Zhu, Yi-Jia Lou, Institute of Pharmacology & Toxicology and Biochemical Pharmaceutics, College of Pharmaceutical Sciences, Zhejiang University, Hangzhou 310058, Zhejiang Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2008(17)
[4]HBV整合引起HepG2細胞microRNA表達譜變化分析[J]. 韓俊峰,阮志華,張蓓,吳玉章.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2007(22)



本文編號：3274911