目的：通過觀察乙型肝炎病毒（HBV）與巨噬細(xì)胞上Toll樣受體3（TLR3）、黑色素瘤分化相關(guān)基因5（MDA-5）、視黃酸誘導(dǎo)基因Ⅰ（RIG-Ⅰ）表達(dá)的相互作用,探討HBV持續(xù)感染分子免疫機(jī)制。方法：以不同載量HBV刺激佛波酯（PMA）誘導(dǎo)的單核源巨噬細(xì)胞,實(shí)時定量PCR檢測刺激2、4、12及24h后巨噬細(xì)胞Toll樣受體3（TLR3）、黑色素瘤分化相關(guān)基因5（MDA-5）、視黃酸誘導(dǎo)基因Ⅰ（RIG-Ⅰ）表達(dá)；以poly I：C刺激與HBV共培養(yǎng)12h的巨噬細(xì)胞,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測定poly I：C刺激4h后培養(yǎng)上清液中β干擾素（IFN-β）的分泌水平。結(jié)果：不同病毒載量組巨噬細(xì)胞TLR3表達(dá)在2、4、12及24h較對照組下調(diào),且病毒高載量組表達(dá)低于病毒低載量組（F值分別為123.64、24.49、6.69、7.63,均P<0.01）；MDA-5和RIG-Ⅰ在上述4個時間點(diǎn)的表達(dá)為病毒高載量組低于病毒低載量組（F值分別為36.44、48.57、46.59、12.77；67.68、74.54、18.31、26.16；均P<0.01）。IFN-β的表達(dá)為：陽性對照... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖SPCR熒光探針法檢測HBVDNA拷貝數(shù)

0叫!0晰!0印Qua爪勺!0印!0印圖5PCR熒光探針法檢測HBVDNA拷貝數(shù)6.ELIsA檢測IFN一p標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立依據(jù)檢測試劑盒的操作步驟，建立IFN一p檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線，RZ一0.981，符驗(yàn)要求，(見圖6)。

表達(dá)不同的是病毒低載量組MDA一5表達(dá)與對照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;各個時間點(diǎn)RIG一I的表達(dá)在各組差異也均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，F(xiàn)值分別為67.68、74.54、18.31和26.16，P值均<0.01，其表達(dá)規(guī)律與MDA一5相似，(見圖7)。9.ELISA檢測IFN一p的表達(dá)4組不同載量HBv與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)12h后，分別加入 PolyLC(50雌/mL)刺激4h，同時設(shè)沒有HBV預(yù)刺激僅 PolyLC刺激的巨噬細(xì)胞為陽性對照組，設(shè)PBs為陰性對照組。收集各組培養(yǎng)上清，ELISA檢測IFN一p。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]乙型肝炎病毒表面抗原抑制TLR2和TLR4的激活[J]. 劉華,陳志翱,成玉明,袁正宏.  微生物與感染. 2008(02)
[2]慢性乙型肝炎患者外周血樹突狀細(xì)胞上Toll樣受體的表達(dá)變化[J]. 陳明泉,施光峰,李謙,盧清,張瓊?cè)A,秦剛,翁心華.  中華傳染病雜志. 2007(12)



本文編號：3268332