目的:通過建立人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體（human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosomes,hucMSC-Ex）修復(fù)葡聚糖硫酸鈉（dextran sulfate sodium salt,DSS）誘導(dǎo)的小鼠炎癥性腸病（inflammatory bowel disease,IBD）模型,確定neddylation在hucMSC-Ex緩解小鼠IBD中的作用,深入研究hucMSC-Ex在調(diào)控neddylation修復(fù)小鼠IBD中的作用機(jī)制,進(jìn)一步運(yùn)用hucMSC-Ex治療IBD。方法:1)HucMSC-Ex的分離鑒定:收集人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,hucMSC）培養(yǎng)上清液,通過相應(yīng)試劑提取hucMSC-Ex并使用透射電鏡、Nano Sight和western blot進(jìn)行相關(guān)鑒定。2)選取6周、20g左右的雄性BABL/C小鼠,飲用含3%DSS的水以構(gòu)建IBD模型。為明確hucMSC-Ex是否通過調(diào)控neddylation來緩解小鼠IBD,... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：89 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

HucMSC-Ex的鑒定

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文21圖3.1HucMSC-Ex定位受損的小鼠結(jié)直腸組織(A)DIR標(biāo)記的hucMSC-Ex在小鼠體內(nèi)的熒光分布；(B)DIR標(biāo)記的hucMSC-Ex在小鼠結(jié)直腸組織內(nèi)的熒光分布。Figure3.1HucMSC-Exlocalizedatdamagedmousecolontissue(A)FluorescencedistributionofDIR-labeledhucMSC-Exinmouse;(B)FluorescencedistributionofDIR-labeledhucMSC-Exinmousecolontissue.3.3.2.HucMSC-Ex緩解DSS誘導(dǎo)的小鼠IBD為了驗(yàn)證hucMSC-Ex對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠IBD是否具有緩解作用，我們構(gòu)建了動(dòng)物模型。結(jié)果表明，Neg組小鼠隨著時(shí)間的推進(jìn)體重也隨之上升，但是DSS組小鼠在第5天出現(xiàn)體重下降，同時(shí)也有血便出現(xiàn)，hucMSC-Ex組小鼠在前6天體重基本沒有變化，第6天后體重略有下降，但不明顯（圖3.2A）。3組小鼠DAI在前5天均無上升變化，DSS組小鼠在第6天時(shí)DAI急劇上升，并且呈持續(xù)上升趨勢(shì)，hucMSC-Ex組小鼠在第6天時(shí)DAI也開始上升，但之后又呈現(xiàn)下降趨勢(shì)（圖3.2B）。處死所有小鼠后，取其結(jié)直腸組織，觀察發(fā)現(xiàn)Neg組小鼠結(jié)直腸組織較長(zhǎng)，DSS組小鼠的結(jié)直腸明顯縮短，而經(jīng)hucMSC-Ex處理后，小鼠的結(jié)直腸長(zhǎng)度有所恢復(fù)（圖3.2C）。H&E染色結(jié)果顯示DSS誘導(dǎo)小鼠腸道炎癥后，小鼠腸絨毛結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，hucMSC-Ex組小鼠結(jié)直腸組織結(jié)構(gòu)完整性有所恢復(fù)（圖3.2D）。QRT-PCR結(jié)果顯示相對(duì)于Neg組小鼠，促炎因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）在DSS組小鼠結(jié)直腸組織中表達(dá)增加，在hucMSC-Ex組小鼠結(jié)直腸組織中表達(dá)顯著降低，相反，抗炎因子（IL-10）在DSS組小鼠結(jié)直腸組織中表達(dá)降低，在hucMSC-Ex組小鼠結(jié)直腸組織中表達(dá)增加（圖3.2E），其表達(dá)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。以上結(jié)果均表明hucMSC-Ex可以有效緩解DSS誘導(dǎo)的小鼠IBD。

HucMSC-Ex調(diào)控neddylation修復(fù)炎癥性腸病的機(jī)制研究22圖3.2HucMSC-Ex緩解DSS誘導(dǎo)的小鼠IBD(A)小鼠體重變化；(B)小鼠DAI評(píng)分；(C)小鼠結(jié)直腸外觀；(D)小鼠結(jié)直腸組織H&E染色（標(biāo)尺=50μm）；(E)QRT-PCR分析小鼠結(jié)直腸組織中炎癥因子表達(dá)水平，*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001byANOVA。Figure3.2HucMSC-ExrelievedDSS-inducedmouseIBD(A)Changesinmiceweight;(B)DAIscoresinmice;(C)Colonappearanceinmice;(D)H&Estaininginmicecolontissue(scalebar=50μm);(E)QRT-PCRanalysisofinflammatoryfactorsexpressioninmicecolontissue,*P<0.05;**P<0.01;***P<0.001byANOVA.3.4.討論外泌體作為各通信系統(tǒng)中的一種新介質(zhì)，參與細(xì)胞間信息傳遞與信號(hào)通路的調(diào)節(jié)[115]。由于其廣泛的性能，外泌體已經(jīng)成功應(yīng)用于不同領(lǐng)域，如腫瘤生物學(xué)、免疫學(xué)和再生醫(yī)學(xué)[116]。在腸粘膜中，促炎因子與抑炎因子間的平衡被打破是引起炎癥的重要機(jī)制。腸道一旦受到刺激，巨噬細(xì)胞被激活，繼而分泌促炎因子：IL-1β、IL-6、IL-8以及TNF-α，IL-8募集中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)于腸粘膜，同時(shí)導(dǎo)致中性粒細(xì)胞的激活，釋放出大量活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS），進(jìn)一步促進(jìn)放大炎癥反應(yīng)[117]。近年來一些研究表明，腸上皮細(xì)胞來源的外泌體通過ANXA1修復(fù)腸粘膜損傷[118]，骨髓來源的DC分泌的外泌體可以緩解2,4,6-三硝

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Enhancing survival, engraftment, and osteogenic potential of mesenchymal stem cells[J]. Daniel García-Sánchez,Darío Fernández,José C Rodríguez-Rey,Flor M Pérez-Campo.  World Journal of Stem Cells. 2019(10)
[2]Inflammatory bowel disease and cancer: The role of inflammation, immunosuppression, and cancer treatment[J]. Jordan E Axelrad,Simon Lichtiger,Vijay Yajnik.  World Journal of Gastroenterology. 2016(20)
[3]Diet and nutritional factors in inflammatory bowel diseases[J]. Danuta Owczarek,Tomasz Rodacki,Renata Domaga?a-Rodacka,Dorota Cibor,Tomasz Mach.  World Journal of Gastroenterology. 2016(03)



本文編號(hào)：3235184