目的研究顯示CXC趨化因子配體12（Chemokine C-X-C motif ligand12, CXCL12）及其受體CXC趨化因子受體4（Chemokine C-X-C motif receptor4, CXCR4）與多種慢性肝臟疾病存在著一定的聯(lián)系。本研究通過(guò)檢測(cè)肝纖維化組織中CXCL12-CXCR4在轉(zhuǎn)錄及蛋白水平的表達(dá)，再利用體外實(shí)驗(yàn)研究CXCL12-CXCR4對(duì)人肝星狀細(xì)胞（Hepatic stellate cell，HSC）的作用及趨化影響，分析CXCL12-CXCR4生物軸在肝纖維化進(jìn)程中的作用。方法收集正常人（n=8）和乙肝肝纖維化（n=20）肝組織標(biāo)本，置于-80℃保存。Trizol法提取人肝組織標(biāo)本總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。設(shè)計(jì)引物，分別擴(kuò)增內(nèi)參β-actin、CXCL12α、CXCL12β及CXCR4特異序列片段，連接T載體。將重構(gòu)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞中后，篩選出目的質(zhì)粒，并進(jìn)行質(zhì)粒小提、定量。分別以4種質(zhì)粒為標(biāo)準(zhǔn)品，建立實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Q-PCR）對(duì)肝組織中CXCL12α、CXCL12β和CXCR4的轉(zhuǎn)錄表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。利用人肝組織冰凍切片，以免疫組化方法... 

【文章來(lái)源】：首都醫(yī)科大學(xué)北京市

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

RNA完整性鑒定

圖 2結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CXCL12α，CXCL12β 和 CXCR4 在肝組織內(nèi)均有表達(dá)，CXCL12α的表達(dá)量高于 CXCL12β 。把 CXCL12α、CXCL12β 和 CXCR4 的定量值比上各自相對(duì)應(yīng)標(biāo)本的內(nèi)參定量值（β -actin）計(jì)算出相對(duì)定量值，比較其在纖維化組（N=20）和正常組（N=8）中的差異。經(jīng)分析，CXCR4 在肝纖維化組中的表達(dá)明顯大于正常肝組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.019）。 CXCL12α 和 CXCL12β 在纖維化組的表達(dá)量均值均大于正常組，但在兩組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， P值分別為 0.186，0.722，如圖 3 所示。

圖 3 CXCL12α、CXCL12β 及 CXCR4 的 Q-PCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果用免疫組化對(duì) CXCR4 和 CXCL12 在肝組織中的表達(dá)進(jìn)行定CXCR4在人肝組織中的表達(dá)情況利用免疫組化技術(shù)對(duì)人肝組織切片進(jìn)行染色，標(biāo)記 CXCR4，利用蘇木素染細(xì)胞核進(jìn)染色定位。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CXCR4 在正常組織中表達(dá)較少，主要在膽上皮有表達(dá)。在肝纖維化組織中，CXCR4 在假小葉邊緣纖維間隔區(qū)域染色明顯較深，表高。另外，CXCR4 在在纖維化組織中增生的膽小管上皮細(xì)胞也有表達(dá)，如

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]肝纖維化病程中Kupffer細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子對(duì)肝星狀細(xì)胞活化增殖、凋亡的調(diào)控[J]. 黃艷,黃成,李俊.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2010(01)
[2]瘦素在實(shí)驗(yàn)性大鼠肝纖維化發(fā)生中的作用機(jī)制研究[J]. 農(nóng)兵,羅和生,梁增文,黃振錄.  華夏醫(yī)學(xué). 2006(03)



本文編號(hào)：3225795