第一部分參附注射液通過(guò)抑制JNK/Nox4和JNK/NFκB途徑來(lái)保護(hù)棕櫚酸誘導(dǎo)的肝AML12細(xì)胞損傷目的:非酒精性脂肪性肝炎（Nonalcoholic steatohepatitis,NASH）包括脂肪變性、肝炎、肝細(xì)胞損傷和纖維化。在本研究中,我們擬探討一種傳統(tǒng)中藥-參附注射液（Shen Fu preparation,SF）在體外肝脂肪變性模型中的保護(hù)作用和潛在機(jī)制。方法:建立棕櫚酸（Palmitic acid,PA）誘導(dǎo)鼠肝細(xì)胞損傷模擬離體NASH模型,采用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的d UTP缺口末端標(biāo)記測(cè)定法（Terminal dexynucleotidyl transferase（Td T）-mediated d UTP nick-end labeling,TUNEL）和甘油三酯比色測(cè)定法（TG Colorimetric Assay）對(duì)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞內(nèi)甘油三酯水平（Intracellular triglyceride,i TG）進(jìn)行評(píng)估;分別采用DCF（Dichlorofluorescein,二氯熒光素）和JC-1（5,5‘,6,6’-四氯-1,1‘,3,3’-四乙基苯酸鹽-... 

【文章來(lái)源】：山東中醫(yī)藥大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
提要
Abstract
第一部分 參附注射液通過(guò)抑制JNK/NOX4和JNK/NFΚB途徑來(lái)保護(hù)棕櫚酸誘導(dǎo)的肝AML12 細(xì)胞損傷
    引言
    材料和方法
        一、實(shí)驗(yàn)試劑與器材
            (一)實(shí)驗(yàn)試劑
            (二)實(shí)驗(yàn)器材
        二、細(xì)胞培養(yǎng)和處理
        三、TUNEL assay(原位末端標(biāo)記法)：檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        四、甘油三酯比色法(Triglyceride Colorimetric Assay)：測(cè)定iTG水平
        五、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)：檢測(cè)細(xì)胞因子水平
        六、免疫印跡(Immunoblot assay)：測(cè)定JNK、NFκB和 Nox4 的表達(dá)水平
        七、JC-1 assay:線粒體膜電位(MMP)檢測(cè)
        八、DCF assay:活性氧(ROS)水平檢測(cè)
        九、FFA uptake assay(Free fatty acid,FFA,游離脂肪酸)
        十、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    結(jié)果
        一、參附注射液(SF)能改善棕櫚酸誘導(dǎo)的AML12 細(xì)胞損傷
        二、參附注射液可以減少棕櫚酸(PA)處理的AML12 細(xì)胞炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生..
        三、參附注射液可以減輕PA誘導(dǎo)的AML12 細(xì)胞線粒體功能障礙
        四、參附注射液通過(guò)抑制JNK-Nox4 通路可以減輕PA誘導(dǎo)的AML12 細(xì)胞凋亡
        五、參附注射液通過(guò)抑制JNK/NFκB通路可以減少PA誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)甘油三酯和細(xì)胞因子的產(chǎn)生
    討論
        一、PA及 PA誘導(dǎo)的NASH模型的相關(guān)研究
        二、JNK/Nox4 通路的相關(guān)研究及機(jī)制
        三、JNK/NFκB通路的相關(guān)研究及機(jī)制
        四、參附注射液(SF)的相關(guān)研究及應(yīng)用進(jìn)展
    結(jié)論
    附圖表
    參考文獻(xiàn)
第二部分 參附注射液能顯著改善脂多糖誘導(dǎo)的腸道上皮細(xì)胞損傷
    引言
    材料和方法
        一、實(shí)驗(yàn)試劑與器材
            (一)實(shí)驗(yàn)試劑
            (二)實(shí)驗(yàn)器材
        二、細(xì)胞培養(yǎng)和處理
        三、細(xì)胞凋亡檢測(cè)：TUNEL法
        四、Albumin influx assay(白蛋白滲透性測(cè)定法)
        五、DCF assay：活性氧(ROS)測(cè)定
        六、Quantitative RT-PCR(實(shí)時(shí)定量PCR)：檢測(cè)轉(zhuǎn)錄水平的細(xì)胞因子的表達(dá)
        七、Western blot：檢測(cè)IκBα和 NFκB/p65 的表達(dá)
        八、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    結(jié)果
        一、LPS誘導(dǎo)HIEC-6 細(xì)胞損傷
        二、ROS增多在LPS處理的HIEC-6 細(xì)胞損傷中起關(guān)鍵作用
        三、LPS通過(guò)ROS介導(dǎo)的NFκB信號(hào)誘導(dǎo)HIEC-6 細(xì)胞損傷
        四、參附注射液(SF)在LPS處理的細(xì)胞中通過(guò)對(duì)ROS和 NFκB活性的抑制來(lái)保護(hù)HIEC-6 細(xì)胞
    討論
    結(jié)論
    附圖表
    參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
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本文編號(hào)：3192743