本博士論文的主要貢獻(xiàn)是：首先采用基于二維凝膠電泳的定量蛋白質(zhì)組技術(shù)分析了乙肝表面抗原持續(xù)表達(dá)細(xì)胞系及其對(duì)照細(xì)胞系的差異蛋白質(zhì)組,共鑒定出81個(gè)差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。通過對(duì)差異蛋白質(zhì)的功能分析,發(fā)現(xiàn)HBsAg的持續(xù)表達(dá)干擾宿主的物質(zhì)和能量代謝。一組促細(xì)胞凋亡的候選蛋白質(zhì)表達(dá)上調(diào),而抗細(xì)胞凋亡的候選蛋白質(zhì)表達(dá)下調(diào),并著重研究GRP78在HBsAg在其中的作用,揭示了乙肝病毒促宿主細(xì)胞凋亡的一種機(jī)制；隨后采用血清蛋白質(zhì)組分析（SERPA）和質(zhì)譜聯(lián)用的技術(shù),首次高通量分析HBV慢性感染轉(zhuǎn)基因鼠模型中自身抗體的產(chǎn)生情況,并鑒定其特異性抗原,得到HBV慢性感染自身抗體譜,為HBV慢性感染引起的慢性肝臟疾病的早期防治提供科學(xué)依據(jù)；分泌蛋白質(zhì)被認(rèn)為對(duì)疾病的早期檢測(cè)和診斷具有極其重要的意義,而糖基化修飾在分泌蛋白質(zhì)中占有相當(dāng)大的比例且蛋白質(zhì)糖基化在很多重要的生理和疾病過程中起重要作用�；诖�,本論文利用親水法富集糖肽結(jié)合體內(nèi)標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組技術(shù),首次大規(guī)模地鑒定了乙肝表面抗原持續(xù)表達(dá)細(xì)胞上清相對(duì)于對(duì)照細(xì)胞系中分泌蛋白質(zhì)及其N-型糖修飾的差異譜；最后發(fā)展了一種基于磁性材料快速質(zhì)膜富集的方法,適用于細(xì)胞質(zhì)膜蛋白... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：135 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

乙型肝炎病毒感染的世界分布

3.1.1HBsAg的表達(dá)情況檢測(cè)平行培養(yǎng)H氏Ag持續(xù)表達(dá)細(xì)胞系s及其對(duì)照細(xì)胞系Neo。在細(xì)胞使用前，收集培養(yǎng)一L清，ELIsA試劑盒檢測(cè)HBsAg的表達(dá)，見圖2一2�？梢奌BsAg持續(xù)表達(dá)細(xì)胞系s中HBsAg的含量很高，而對(duì)照細(xì)胞系Neo細(xì)胞上清中未檢出HBsAg。HBsAg持續(xù)表達(dá)細(xì)胞系的成功構(gòu)建，模擬部分臨床乙肝攜帶者的特征，為研究HBsAg持續(xù)表達(dá)對(duì)宿主細(xì)胞的影響提供了極佳的模型。︵0價(jià)葉00︶哎山偽訪HNeoS圖2一25和Neo細(xì)胞上清中HBsAg的含量，S和Neo分別為HBsAg持續(xù)表達(dá)細(xì)胞系HepGZ一s一GZ及對(duì)照細(xì)胞系HepGZ一Neo一F4的縮寫。 3.L2HBsAg持續(xù)表達(dá)細(xì)胞系增殖與抗凋亡能力檢測(cè)凋亡一直是人們所關(guān)注的問題，在臨床上慢性乙肝患者也表現(xiàn)出不同程度的肝損傷。我們對(duì)HBsAg持續(xù)表達(dá)細(xì)胞株進(jìn)行了增殖和凋亡相關(guān)的檢測(cè)。staurosporine是一種可以通透細(xì)胞膜的蛋白激酶C(PKC)抑制劑〔4】。喜樹堿(Cal即tothecin)是一種拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，其作用機(jī)制是使細(xì)胞DNA單鏈/雙鏈斷裂，從而干擾其基因轉(zhuǎn)錄引發(fā)凋亡。二者在生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常作為凋亡誘導(dǎo)劑。用上述兩種凋亡誘導(dǎo)劑處理細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡細(xì)胞百分比，用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒CCK一8檢測(cè)凋亡發(fā)生后細(xì)胞的存活能力

和另外一種凋亡誘導(dǎo)劑Camptothecin處理細(xì)胞，具體流程如本章方法部分2.14所述，不經(jīng)處理的兩株細(xì)胞系{1為對(duì)照。實(shí)驗(yàn)所用溶劑 DM50也被沒置為對(duì)照以消除其對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，流式細(xì)胞儀分析凋亡細(xì)胞比例，如圖2一3C)所示，無論是staurospo，，i，飛e還是Ca，1、ptotlleein處理后HBsAg持續(xù)表達(dá)細(xì)胞系的凋亡發(fā)生比例都明顯高于對(duì)照，差異具有顯著性。從HBsAg持續(xù)表達(dá)細(xì)胞系的特征分析提示我們，HBsAg的持續(xù)表達(dá)可以導(dǎo)致宿主細(xì)胞的增殖能力下降和易于凋一亡。但是通過何種途徑介導(dǎo)至今仍不清楚，山于HBV感染和細(xì)胞組成成分的復(fù)雜性

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Prevalence of occult hepatitis B virus infection in haemodialysis patients from central Greece[J]. Paraskevi Mina,Sarah P Georgiadou,Christos Rizos,George N Dalekos,Eirini I Rigopoulou.  World Journal of Gastroenterology. 2010(02)



本文編號(hào)：3144721