目的:由于肥胖和2型糖尿�。═2DM）的流行,非酒精性脂肪性肝�。∟AFLD）的發(fā)病率逐年增高,目前已成為慢性肝臟疾病的主要病因。有效治療NAFLD不但可以減少終末期肝病發(fā)病率,而且可以降低T2DM大血管和微血管并發(fā)癥及心血管疾病死亡率,因此,對于NAFLD的防治刻不容緩。近年來,越來越多的研究表明胰高血糖素樣肽-1受體激動劑（GLP-1Ra）利拉魯肽可以安全有效的改善NAFLD,然而其潛在機(jī)制尚未闡明。本研究以高脂飲食（HFD）誘導(dǎo)的NAFLD小鼠和棕櫚酸（PA）誘導(dǎo)脂肪變的人肝細(xì)胞系（HL-7702）為研究對象,旨在探討高脂對肝臟脂質(zhì)代謝的關(guān)鍵酶—脂肪甘油三酯脂肪酶（ATGL）的影響,并探究其在NAFLD發(fā)生和發(fā)展中的重要作用;通過RNA芯片和生物數(shù)據(jù)庫篩選出影響ATGL表達(dá)的miR-124a,進(jìn)一步應(yīng)用細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)驗(yàn)證miR-124a是否通過抑制ATGL/Sirt1信號通路進(jìn)而影響肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝和炎癥反應(yīng);并且應(yīng)用利拉魯肽干預(yù)NAFLD小鼠和PA誘導(dǎo)的脂肪變的肝細(xì)胞,進(jìn)一步探討利拉魯肽是否通過miR-124a/ATGL/Sirt1信號通路改善NAFLD。方法:1.以HFD誘導(dǎo)的... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

正常和高脂飲食組小鼠體重和血脂指標(biāo)

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文1.2.2 NAFLD 小鼠動物模型的建立HFD 12 周末，處死小鼠，獲取小鼠肝臟組織，制作肝臟冰凍切片后，H和油紅 O 染色顯示 HFD 小鼠肝臟內(nèi)脂質(zhì)沉積明顯高于 chow 組。定量檢測肝臟內(nèi)脂質(zhì)含量，HFD 小鼠肝臟內(nèi)甘油、TG 和 TC 均明顯高于 chow 組小鼠，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）（如圖 2A-D）。由于肝臟內(nèi)脂質(zhì)沉積可誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的發(fā)生，并進(jìn)一步促進(jìn) NAFLD 向 NASH 進(jìn)展，因此我們檢測了肝臟內(nèi)炎性指標(biāo)。免疫組織化學(xué)染色顯示巨噬細(xì)胞標(biāo)記物 CD68 在 HFD 組小鼠肝臟中的表達(dá)明顯高于 chow 組小鼠。qRT-PCR 進(jìn)一步檢測發(fā)現(xiàn)，HFD 組小鼠肝臟中的炎性因子 IL-1β、TNF-α和 NF-κB p65 的表達(dá)量均明顯高于 chow 組小鼠，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）（如圖 2E-F）。

圖 3 兩組小鼠肝臟內(nèi)脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的比較1.2.4 ATGL 在脂肪變肝臟組織中表達(dá)下降提取上述兩組小鼠肝臟組織蛋白樣品，western blot 進(jìn)一步檢測肝臟中 ATGL的蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示，與 chow 小鼠相比，HFD 組小鼠肝臟中 ATGL 蛋白表達(dá)明顯下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05）（如圖 4A）。肝臟組織 ATGL 免疫熒光結(jié)果顯示 chow 小鼠肝臟中 ATGL 表達(dá)量明顯高于 HFD 小鼠，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.05），與 western blot 檢測結(jié)果一致（如圖 4B）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miRNA-103: Molecular link between insulin resistance and nonalcoholic fatty liver disease[J]. Qian Xu,Ying Li,Yong-Fang Shang,Hui-Ling Wang,Min-Xiu Yao.  World Journal of Gastroenterology. 2015(02)
[2]Circulating microRNAs in patients with non-alcoholic fatty liver disease[J]. Serkan Dogan,Gokmen Zararsiz,Sebnem Gursoy,Kadri Guven,Omer Ozbakir,Munis Dundar,Mehmet Yucesoy.  World Journal of Hepatology. 2014(08)
[3]Current status and agenda in the diagnosis of nonalcoholic steatohepatitis in Japan[J]. Yoshio Sumida,Yuichiro Eguchi,Masafumi Ono.  World Journal of Hepatology. 2010(10)



本文編號：3144295