Toll樣受體（Toll-like receptors, TLRs）是參與天然免疫的一類(lèi)重要蛋白質(zhì)分子,也是連接非特異性免疫和特異性免疫的橋梁。在人類(lèi)中已經(jīng)鑒定了10種TLRs,在小鼠中有13種,其廣泛分布于多種細(xì)胞表面,但主要表達(dá)于和宿主防御功能有關(guān)的細(xì)胞,如單核巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞等。在特定條件下,TLRs異常表達(dá)并過(guò)度激活,導(dǎo)致機(jī)體功能紊亂,引發(fā)各種疾病,例如炎癥性腸�。↖BD）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（AR）等。因此,尋找新的能夠調(diào)控TLRs信號(hào)通路的阻斷物,可有望為治療TLRs信號(hào)過(guò)度活化相關(guān)的免疫疾病帶來(lái)新希望。D182是一種海洋來(lái)源的共生菌產(chǎn)物,我們前期研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)LPS誘發(fā)的小鼠膿毒癥模型具有治療作用,本文以D182為研究對(duì)象,對(duì)其治療DSS誘導(dǎo)的小鼠腸炎及其分子機(jī)制行了研究。1、小分子化合物D182能改善DSS誘導(dǎo)的小鼠急性腸炎的相關(guān)癥狀炎癥性腸�。↖BD）是由多種因素引起的局部炎癥,且相關(guān)TLRs信號(hào)通路在其發(fā)病過(guò)程中其關(guān)鍵作用。為了探究D182的體內(nèi)抗炎效果,我們構(gòu)建了DSS誘導(dǎo)的小鼠急性腸炎模型,分析了D1... 

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D182對(duì)于巨唆細(xì)胞向結(jié)腸部位浸潤(rùn)的影響

圖3-2 D182對(duì)小鼠巨哩細(xì)胞細(xì)胞活力的影響Fig3-2 Effect of D182 on mouse macrophages cell viability, mouse macrophages cellswere treated with various concentrations of D182 for 24 or 48 h. Cell viability wasdetermined by CCK-8 assay. **p<0.01, ***p<0.001 compared to control.3.4.3 D182在基因和蛋白水平上抑制TLR2/6和TLR4配體誘導(dǎo)的RA\V264.7細(xì)胞系炎性因子的產(chǎn)生首先我們蹄選了兒種TLRs配體刺激小鼠巨Pi細(xì)胞的能力（圖3-3)，通過(guò)實(shí)驗(yàn)我們選取PamCSK4 lOOng/mK LPS lOOng/ml和PGN lOug/ml作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)用的濃度。我們采用Q-PCR的方法，檢測(cè)RAW264.7細(xì)胞TNF-a mRNA的表達(dá)水平，jfj Elisa的方法檢測(cè)培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞TNF-a分泌能力，如圖3-4，D182對(duì)兒

巨唾細(xì)胞進(jìn)行了驗(yàn)證，我們首先對(duì)獲取的細(xì)胞進(jìn)行了鑒定，從形態(tài)上觀察到細(xì)胞大部分呈圓形，貼壁生長(zhǎng)（圖3-7A)。F4/80是小鼠原代腹腔巨唾細(xì)胞的表面標(biāo)志，我們用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)所獲取細(xì)胞表面F4/80的表達(dá)，從而鑒定它們是否為巨噴細(xì)胞。如圖3-7B所示F4/80陽(yáng)性的細(xì)胞約占總細(xì)胞的75.49%,說(shuō)明我們獲取的細(xì)胞可以滿足我們的實(shí)驗(yàn)要求。Q-PCR和Elisa法檢測(cè)的D182對(duì)小鼠原代巨唾細(xì)胞TNF-ot基因表達(dá)的影響，如圖3-8所示，D182對(duì)多種配體刺激小鼠原代巨嗟細(xì)胞TNF-a基因表達(dá)具有抑制效果且呈濃度依賴(lài)性。除此之外我們用Q-PCR方法檢測(cè)了 D182對(duì)多種TLRs配體刺激引起的小鼠原代腹腔巨暖細(xì)胞IL-6產(chǎn)生的影響，如圖3-9所示，D182對(duì)多種TLRs配體刺激引起的小鼠原代腹腔巨噴細(xì)胞IL-6的產(chǎn)生有抑制作用且呈濃度依賴(lài)性。驗(yàn)證了我們上述的結(jié)果，證明D182確實(shí)能抑制多種TLRs配體誘導(dǎo)小鼠巨唾細(xì)胞相關(guān)炎性因子的產(chǎn)生。A BaDsts 53* Csu 53' Cata OO!‘I:響 C3t5 . . Data.XJ Dsu.OOS, ::?6：.； - " :. a- ' . c■■ “ 1...■ ■.-.丨.I....丨....I..,..廠.■ I,, 1,,.,, 0 2>： 40： OX ！0:

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]Role of Toll-like receptors in health and diseases of gastrointestinal tract[J]. Greg Harris,Rhonda KuoLee.  World Journal of Gastroenterology. 2006(14)



本文編號(hào)：3144084