全世界大約20億人曾經(jīng)感染過或者現(xiàn)在感染了乙型肝炎病毒,超過了3億五千萬人是乙肝病毒攜帶者。該病毒雖然是最常見的人類病原之一,但是它卻引起了非常嚴(yán)重的公眾健康問題。然而由HBV感染所導(dǎo)致的肝癌的發(fā)生機(jī)理目前尚不完全清楚。研究表明,病毒與宿主因子之間的相互作用可激活致瘤信號(hào)通路并引起一系列的細(xì)胞轉(zhuǎn)化,如細(xì)胞染色體不穩(wěn)定性的提高、端粒磨損、基因突變等。而且,研究發(fā)現(xiàn),HBV基因組所編碼的HBx在誘導(dǎo)宿主基因組不穩(wěn)定性方面發(fā)揮著重要功能。RecQ DNA家族解螺旋酶在進(jìn)化中是高度保守的,在維持細(xì)胞基因組的完整性方面具重要功能。微生物如大腸桿菌、釀酒酵母僅僅只有一種RecQ解螺旋酶,但高等真核生物卻含有幾種RecQ解旋酶,如在人細(xì)胞中,目前發(fā)現(xiàn)了五種RecQ解螺旋酶,即RECQL、BLM, WRN、RTS和RecQ4。RecQ解螺旋酶定位在細(xì)胞核里,在DNA復(fù)制、重組和修復(fù)中發(fā)揮重要作用。為了進(jìn)一步揭示HBx的生物學(xué)功能及其在肝癌誘導(dǎo)發(fā)生中的作用,本研究通過酵母雙雜交方法篩選到了一個(gè)可以與HBx發(fā)生相互作用的人解螺旋酶蛋白（DNA helicase Q1-like, RECQL）。為了進(jìn)一步驗(yàn)... 

【文章來源】：湖北大學(xué)湖北省

【文章頁(yè)數(shù)】：52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
一、緒論
    1 乙型肝炎病毒X蛋白
        1.1 HBx的生物學(xué)功能
            1.1.1 HBx的反式激活作用和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能
            1.1.2 HBx在肝癌中的誘導(dǎo)與轉(zhuǎn)化
            1.1.3 HBx在細(xì)胞凋亡中的調(diào)控機(jī)制
                1.1.3.1 HBx抑制肝細(xì)胞凋亡
                1.1.3.2 HBx促進(jìn)細(xì)胞凋亡
    2 染色體穩(wěn)定性下降可導(dǎo)致腫瘤發(fā)生
    3 RECQL解螺旋酶
        3.1 RECQ的結(jié)構(gòu)與生物學(xué)特性
            3.1.1 RECQL在DNA復(fù)制,重組,修復(fù)中的作用
            3.1.2 RECQL在抑制癌癥和腫瘤方面的作用
    4 研究的目的與意義
二、材料與方法
    1 材料
        1.1 細(xì)胞系、質(zhì)粒、菌株和引物
            1.1.1 細(xì)胞系
            1.1.2 質(zhì)粒
            1.1.3 菌株
            1.1.4 引物
        1.2 培養(yǎng)基
        1.3 試劑和酶
        1.4 主要緩沖液
    2 方法
        2.1 PCR
        2.2 質(zhì)粒DNA的抽提
        2.3 大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.4 大腸桿菌的常規(guī)轉(zhuǎn)化
        2.5 大腸桿菌的快速轉(zhuǎn)化
        2.6 SDS-PAGE
        2.7 免疫印記
        2.8 哺乳動(dòng)物細(xì)胞HEK293的復(fù)蘇
        2.9 哺乳動(dòng)物細(xì)胞HEK293的凍存
        2.10 哺乳動(dòng)物細(xì)胞HEK293的組織培養(yǎng)
        2.11 哺乳動(dòng)物細(xì)胞的轉(zhuǎn)染（以sofast轉(zhuǎn)染試劑為列）
        2.12 免疫共沉淀
三、結(jié)果與分析
    1 HBx相互作用蛋白的篩選
    2 表達(dá)載體的構(gòu)建
    3 免疫共沉淀驗(yàn)證HBx與RECQL之間的相互作用
    4 HBx與RECQL共定位在細(xì)胞中
    5 HBx與RECQL缺失突變體的構(gòu)建
四、討論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]乙型肝炎病毒X基因?qū)φ８渭?xì)胞HL7702凋亡影響的初步探討[J]. 石紅麗,范寶峰,尤紅娟,劉曉梅,史震,湯仁仙.  徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2008(04)
[2]染色體不穩(wěn)定分子機(jī)制及其與腫瘤發(fā)生研究的新進(jìn)展[J]. 晏光榮.  癌癥. 2004(03)
[3]p73β inhibits transcriptional activities of enhancer I and X promoter in hepatitis B virus more efficiently than p73α[J]. Tsai-Ping Li.  World Journal of Gastroenterology. 2002(06)



本文編號(hào)：3143513