肝功能衰竭嚴重威脅人類健康。原位肝移植是目前最好的治療手段,但治療費用高且受肝源限制,迄今仍難以作為終末期肝病患者的常用治療方法。作為肝移植的替代治療,有研究證實肝細胞移植有助于肝損傷的恢復(fù)。但由于肝細胞同樣來源受限,而且分離的肝細胞壽命很短,凍存后活性差等原因,嚴重阻礙了其臨床應(yīng)用。肝臟卵圓細胞是成體肝臟干細胞,在嚴重肝損傷或肝細胞再生受到抑制時,則卵圓細胞增殖進而分化,來完成肝組織的再生。探討卵圓細胞的增殖與分化特性,了解調(diào)控卵圓細胞生長和分化的細胞因子及其之間的相互關(guān)系,對肝損傷的修復(fù)具有重要意義。現(xiàn)已證實成體骨髓干細胞可以分化為肝實質(zhì)細胞。目前骨髓干細胞的提取及其體外培養(yǎng)體系不一致, 誘導(dǎo)方法、誘導(dǎo)因子以及誘導(dǎo)時間等問題的研究還不充分。因此,很有必要對骨髓干細胞體外誘導(dǎo)分化進行探討。有關(guān)骨髓干細胞移植治療肝功能衰竭的研究已取得可喜的成果。細胞移植后是否可分化為肝細胞以及移植后受體的肝功能恢復(fù)問題,目前仍有爭議。另外關(guān)于移植細胞如何進入肝實質(zhì)?移植途徑與移植細胞的轉(zhuǎn)歸是否有關(guān)?移植細胞在受體體內(nèi)的分布等問題仍然不清楚。為此,本研究分以下幾部分進行:1、以大鼠肝干細胞系WB F-3... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：112 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

不同誘導(dǎo)分化時間WBF-344細胞AFP、ALBmRNA表達GAPDH

第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文為探討 WB F-344 細胞在體外向肝細胞的定向誘導(dǎo)分化，我們用含 10％FCS的 DMEM，并加入 HGF、EGF、胰島素及地塞米松組成特異分化體系，對 WBF-344 細胞進行體外誘導(dǎo)分化，于不同時間點光鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，一周后細胞出現(xiàn)形態(tài)變化，主要表現(xiàn)為集聚、延伸并形成小梁樣結(jié)構(gòu)；之后細胞生長速度減慢，細胞逐漸由六邊形轉(zhuǎn)變?yōu)樗笮危? 周后細胞生長緩慢，逐漸死亡（圖 5A）。誘導(dǎo) 0 天 誘導(dǎo) 1 周 誘導(dǎo) 2 周

3、骨髓間充質(zhì)干細胞 ALB、AFP mRNA 的表達在培養(yǎng)的不同時間點，通過半定量 RT-PCR 法檢測骨髓間充質(zhì)干細胞 ALB、AFPmRNA 的表達，發(fā)現(xiàn)新鮮分離的骨髓干細胞表達少量的 AFPmRNA,而不表達 ALmRNA。在誘導(dǎo)組，培養(yǎng) 1 周時，出現(xiàn)少量的 ALB mRNA，隨著分化時間的延長，ALB mRNA 的表達逐漸增加，3 周時達高峰，以后開始下降。誘導(dǎo)２周和 3 周后分別撤去 HGF 組，４周時，前者未檢測到 ALB mRNA 而后檢測到 ALB mRNA。AFPmRNA的表達量在 2 周時最大，以后逐漸減少。在非誘導(dǎo)組，各時間段 ALB mRNA 均（－），而 AFP mRNA 在 0 天時表達量最大，以后逐漸減少，3 周時幾乎檢測不到。在紫外燈下測定凝膠電泳結(jié)果的灰度值，以 GAPDH 的灰度值為 1，求得各組的相對灰度值，以誘導(dǎo)時間為橫坐標(biāo)，相對灰度值為縱坐標(biāo)作圖，結(jié)果如圖 4，可以看出誘導(dǎo)組于 3 周時表達 ALB mRNA 最多，而于 2 周時 AFP mRNA 表達量最多。M 0d 1w 2w 3w 4w 2w- 3w- + M 0d 1w 2w 3w 4w +A

【參考文獻】：
期刊論文
[1]小鼠骨髓干細胞誘導(dǎo)分化為肝細胞的實驗研究[J]. 周一鳴,胡大榮,姚鵬,范公忍.  中華肝臟病雜志. 2004(12)



本文編號：3129607