第一部分大鼠轉化生長因子-β₃基因的克隆及其在肝星狀細胞中的表達目的:克隆大鼠TGF-β₃基因并觀察其在轉染肝星狀細胞株（HSC-T6）后的表達情況。方法:采用逆轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）從大鼠成骨細胞中擴增出特異性片段,經(jīng)酶切鑒定證實為大鼠TGF-β₃cDNA,將此片段插入pcDNA3.1（+）表達載體,構建得到pcDNA3.1（+）-TGF-β₃重組質粒。應用陽離子脂質體介導的基因轉移技術將TGF-β₃表達載體導入HSC-T6,在轉染24h、48h、72h后,用熒光定量PCR法進行瞬時表達的檢測。結果:①重組真核表達載體pcDNA3.1（+）-TGF-β₃經(jīng)限制性內切酶NheI、XbaI酶切,電泳后顯示1.2kb的TGF-β₃目的片段和5.4kb的pcDNA3.1（+）載體片段,經(jīng)測序證實酶切片段與GenBank中登記的TGF-β₃序列相同,證實pcDNA3.1（+）-TGF-β₃

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組質粒結構示意圖

【參考文獻】：
期刊論文
[1]轉化生長因子-β3對增生性瘢痕成纖維細胞的生物學作用（英文）[J]. 唐世杰,胡素鑾,王玉銀,申紀奎.  中國臨床康復. 2004(17)
[2]結締組織生長因子及其在胰腺纖維化中的作用機制[J]. 孫蘊偉,袁耀宗.  胰腺病學. 2003(02)



本文編號：3125010