第一部分大鼠轉(zhuǎn)化生長因子-β₃基因的克隆及其在肝星狀細(xì)胞中的表達(dá)目的:克隆大鼠TGF-β₃基因并觀察其在轉(zhuǎn)染肝星狀細(xì)胞株（HSC-T6）后的表達(dá)情況。方法:采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）從大鼠成骨細(xì)胞中擴(kuò)增出特異性片段,經(jīng)酶切鑒定證實(shí)為大鼠TGF-β₃cDNA,將此片段插入pcDNA3.1（+）表達(dá)載體,構(gòu)建得到pcDNA3.1（+）-TGF-β₃重組質(zhì)粒。應(yīng)用陽離子脂質(zhì)體介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移技術(shù)將TGF-β₃表達(dá)載體導(dǎo)入HSC-T6,在轉(zhuǎn)染24h、48h、72h后,用熒光定量PCR法進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)的檢測。結(jié)果:①重組真核表達(dá)載體pcDNA3.1（+）-TGF-β₃經(jīng)限制性內(nèi)切酶NheI、XbaI酶切,電泳后顯示1.2kb的TGF-β₃目的片段和5.4kb的pcDNA3.1（+）載體片段,經(jīng)測序證實(shí)酶切片段與GenBank中登記的TGF-β₃序列相同,證實(shí)pcDNA3.1（+）-TGF-β₃

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]轉(zhuǎn)化生長因子-β3對增生性瘢痕成纖維細(xì)胞的生物學(xué)作用（英文）[J]. 唐世杰,胡素鑾,王玉銀,申紀(jì)奎.  中國臨床康復(fù). 2004(17)
[2]結(jié)締組織生長因子及其在胰腺纖維化中的作用機(jī)制[J]. 孫蘊(yùn)偉,袁耀宗.  胰腺病學(xué). 2003(02)



本文編號：3125010