暴發(fā)性肝衰竭（FHF）是一死亡率極高,以大量肝細(xì)胞凋亡、嚴(yán)重肝損害為特征的臨床疾病。絲/蘇氨酸激酶Pim-3基因具有顯著的肝細(xì)胞凋亡抑制和生長促進(jìn)效應(yīng),預(yù)期能在FHF的疾病治療中發(fā)揮積極作用。為此,本課題進(jìn)行了Pim-3基因轉(zhuǎn)染動物活體肝組織的實(shí)驗(yàn),目的是探討Pim-3基因?qū)HF的組織修復(fù)或肝保護(hù)效應(yīng)及其作用機(jī)制。課題研究采取了多步驟分階段的方式進(jìn)行。首先,采用RT-PCR的方法,從大鼠心肌組織中分離并克隆了Pim-3基因。通過基因重組技術(shù),完成了Pim-3基因質(zhì)粒載體的構(gòu)建,并利用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)順利地實(shí)現(xiàn)了重組體質(zhì)粒pEGFP-N2/Pim-3在體外真核細(xì)胞的表達(dá)和活性測定;其次,采用常規(guī)和流體力學(xué)方法進(jìn)行GFP表達(dá)質(zhì)粒溶液的鼠尾靜脈注射,證明常規(guī)注射和流體力學(xué)注射是兩種不同的活體基因轉(zhuǎn)染方法,具有不同的器官靶向性和基因轉(zhuǎn)染效率。其中流體力學(xué)方法是一個高效的肝靶向性動物活體基因轉(zhuǎn)染方法;再次,采用腹腔注射LPS/D-GalN的方法建立FHF大鼠模型。找到了制備動物模型最佳的藥物劑量,證明小劑量LPS可誘導(dǎo)D-GalN致敏大鼠產(chǎn)生顯著但非致死性的急性肝衰竭。其中,肝細(xì)胞凋亡是LPS/D... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：183 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

質(zhì)粒pEGFP一2圖譜(其中標(biāo)明限制性位點(diǎn)和多克隆位點(diǎn))

“RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA后，’口入”酶切位“的克隆弓’物進(jìn)‘了PCR擴(kuò)增。擴(kuò)尹產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后，得到一條預(yù)期的998bp目的基因全長編碼cDNA，尤明顯雜帶(圖2.4)。圖2.4人鼠Pim一基因全長編碼cONA擴(kuò)增電泳圖M:基因cDNA片段 DL2000DNAMarker;1道:目的2.3.3轉(zhuǎn)化菌平板篩選結(jié)果

樣品的OD260nm/OD280nm值為 1.89，表明總RNA純度較高，沒有蛋白質(zhì)的殘余，質(zhì)量可靠。總RNA非變性瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果(圖2.3)顯示:185(相當(dāng)于1.gkb)、285(相當(dāng)于4.skb)二條帶較為清晰，而5s較淡，提示總RNA提取較為完整、無明顯降解。


本文編號：3110331