丙型病毒性肝炎是一種危害嚴(yán)重，影響廣泛的疾病，丙型肝炎病毒為輸血后肝炎的主要病因。探討HCV的病原學(xué)特征，發(fā)病機(jī)理及研制診斷試劑及疫苗都要求對(duì)病毒基因一級(jí)結(jié)構(gòu)有深入的了解。HCV呈現(xiàn)高度的基因異質(zhì)性，變異分布在全基因組，不同的區(qū)域頻率不一樣，5’端非翻譯區(qū)（5’UTR）最保守，許多商業(yè)試劑的開(kāi)發(fā)都是用此區(qū)段作為檢測(cè)HCV存在、定量和分型的基礎(chǔ)。另外5’UTR大部分區(qū)域和核心蛋白（C）區(qū)的前30個(gè)核苷酸（nt）共同構(gòu)成了IRES結(jié)構(gòu)，介導(dǎo)了HCV的翻譯，因此此區(qū)又可作為抗病毒藥物設(shè)計(jì)的靶點(diǎn)。胞膜區(qū)2（E2）是全基因組變異最大的區(qū)域，在其N(xiāo)端第1-27個(gè)氨基酸（aa）及隨后的第91-97aa高度可變，分別稱(chēng)之為高變區(qū)1（HVR1），高變區(qū)2（HVR2），其氨基酸多樣性分別達(dá)到80％和100％，是最為常用的檢測(cè)準(zhǔn)種的區(qū)域。 本文用PCR擴(kuò)增產(chǎn)物直接測(cè)序的方法對(duì)中國(guó)大陸部分地區(qū)的流行株進(jìn)行基因分型，從基因、分子水平分析我國(guó)的HCV流行株基因異質(zhì)性特點(diǎn)及可能的原因，探討其與疾病進(jìn)展的關(guān)系。用RT-nested-hot start-PCR方法擴(kuò)增5’UTR序列，產(chǎn)物純化后自動(dòng)測(cè)序儀測(cè)序，按照... 

【文章來(lái)源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：105 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

192HCVS’U丁R區(qū)基因擴(kuò)增產(chǎn)物電泳圖

72℃7min1eycle體系:10只PCRreaetionbLLffer3林1林林拌4︸、︸︸、︶2.51刀MdNTPrnix0nU20林MPrimer720林MPrimers1stPCRProdL一ctsExTaq(ZU/林I)ddH，O2協(xié)l0.4林l21.2LTotal、/olume30協(xié)I上。孫l，作2%瓊脂糖凝膠電泳(150v)，紫外燈下觀察結(jié)

圖5.從菌液中擴(kuò)增HVR!片段電泳圖上面的電泳條帶為質(zhì)粒，下面的577bp的條帶是目的條帶F195.HVRIPCR朋plifieationproductsfromtransf.Or系:10又PCR:eaetionbu挽r3抖l2.5rnMdNTPmix2.4林I20拼MPrimer70·5林l20拼MPrimer80·5林I處理后的菌液2川Taqplus(ZU/”l)0.4林lddH:o一一-一一衛(wèi)上勁絲一TotalVolume30拼l條件:2些呈3min1eycle

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]丙型肝炎病毒結(jié)構(gòu)區(qū)基因變異的研究[J]. 陳嵩,王宇明.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2001(03)



本文編號(hào)：3063156