目的：觀察羊膜上皮細胞在正常免疫大鼠體內存活、遷徙及對大鼠肝硬化的治療作用,擬為人羊膜上皮細胞應用于肝硬化治療提供實驗理論。方法：參照文獻提取羊膜上皮細胞并檢測細胞總數(shù)、存活率及純度,檢測冰凍復蘇前后細胞數(shù)及存活率。80只SD大鼠,完全隨機設計分五組,移植4×106細胞約0.4ml懸浮液1周為A組,移植等量細胞懸浮液2周為B組,移植等量生理鹽水為C組,肝硬化組為D組,空白對照組為E。參照預實驗誘導肝硬化模型,通過脾實質移植首次將羊膜上皮細胞注入正常免疫大鼠模型內,通過檢測A、B兩組大鼠模型各臟器中人類特有Alu基因重復序列和白細胞抗原G是否存在及陽性臟器率的差異,觀察細胞在體內的存活和各臟器中遷徙情況；形態(tài)學觀察各組臟器；對B、C、D組肝臟行組織學HE染色,采用Chevallier肝纖維化組織學半定量計分系統(tǒng)分析大鼠肝硬化程度；采用免疫組化評分系統(tǒng)半定量檢測B、C、D、E組肝臟中TGF-β1的表達；血清生化儀定量分析B、C、D、 E組血清中AST、ALT、ALB水平。結果：本實驗提取羊膜上皮細胞數(shù)平均約為1.1×108/胎盤,存活率及純度分別為84%和91%,凍存復蘇后的細胞數(shù)和存活率... 

【文章來源】：中南大學湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
縮略詞匯集表
1 緒論
    1.1 肝硬化的發(fā)病特點及病因
    1.2 肝硬化治療現(xiàn)狀
    1.3 干細胞在肝病的應用現(xiàn)狀
    1.4 人羊膜上皮細胞
        1.4.1 人羊膜上皮細胞概述
        1.4.2 人羊膜上皮細胞肝細胞特性的研究進展
        1.4.3 人羊膜上皮細胞的研究不足
    1.5 課題擬解決問題
2 材料與方法
    2.1 實驗材料與設備
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 生化試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實驗方法及步驟
        2.2.1 羊膜上皮細提取、凍存、鑒定及懸浮液制備
        2.2.2 實驗分組及肝硬化模型制備
        2.2.3 細胞移植
        2.2.4 標本收集及移植效果檢測方法
        2.2.5 統(tǒng)計分析
3 結果
    3.1 提取細胞檢測
        3.1.1 細胞總數(shù)及存活率
        3.1.2 細胞純度
        3.1.3 凍存后細胞數(shù)及存活率
    3.2 實驗動物存活情況
    3.3 移植效果檢測
        3.3.1 標本形態(tài)學與組織學觀察
        3.3.2 DNA-PCR檢測Alu基因
        3.3.3 免疫組化結果
        3.3.4 血清ALT\AST\ALB檢測
4 討論
5 結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間主要的研究成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]復合因素誘導大鼠肝硬化模型的建立[J]. 劉紅梅,張玉玲,康金玲,王銀.  寧夏醫(yī)科大學學報. 2012(03)
[2]人羊膜上皮細胞具有向肝細胞樣細胞分化的特性[J]. 羅宏武,黃湘俊,黃飛舟,劉潯陽.  中華肝臟病雜志. 2011 (08)
[3]Transplantation of microencapsulated umbilical-cord-blood-derived hepatic-like cells for treatment of hepatic failure[J]. Fang-Ting Zhang, Hui-Juan Wan, Ming-Hua Li, Jing Ye, Mei-Jun Yin, Chun-Qiao Huang, Jie Yu, Central Laboratory, Peking University Shenzhen Hospital, Shenzhen 518036, China.  World Journal of Gastroenterology. 2011(07)
[4]人羊膜上皮細胞橫向分化及脾內移植的初步研究[J]. 羅宏武,黃湘俊,黃飛舟,劉潯陽.  中國修復重建外科雜志. 2011(02)
[5]Stem cells for liver tissue repair:Current knowledge and perspectives[J]. Philippe A Lysy,David Campard,Fran oise Smets,Mustapha Najimi,Etienne M Sokal.  World Journal of Gastroenterology. 2008(06)



本文編號：3035396