目的1.探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs）體外誘導(dǎo)分化為類肝細(xì)胞（Heatocyte-like cells, HLCs）的可行性及方法。2.BM MSCs及HLCs分別與刀豆蛋白A （concanavalin A, ConA）刺激后的脾淋巴細(xì)胞（Lymphocyte, LYM）共培養(yǎng),觀察LYM增殖及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（Transforming Growth Factor β1, TGF-β1）及白細(xì)胞介素6（Interleukin-6, IL-6）的表達(dá)情況。3.建立大鼠80%肝切除模型,通過(guò)門靜脈BM MSCs移植,研究BM MSCs對(duì)大鼠自體80%肝切除殘肝肝再生及修復(fù)作用的實(shí)驗(yàn)研究。方法1.采用密度梯度離心聯(lián)合貼壁篩選法分離、純化、鑒定BM MSCs,運(yùn)用改良體外肝分化培養(yǎng)體系誘導(dǎo)BM MSCs向HLCs分化。誘導(dǎo)后4周,觀察細(xì)胞形態(tài)的變化；采用EILSA法檢測(cè)誘導(dǎo)分化后HLCs上清液中白蛋白（Albumin, ALB）及尿素的分泌；RT-PCR檢測(cè)肝細(xì)胞標(biāo)志性基因甲胎蛋白（Alpha-Fetal Prot... 

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體外細(xì)胞因子誘導(dǎo)后BMMSCs細(xì)胞形態(tài)的改變A：誘導(dǎo)前BMMSCs;B誘導(dǎo)后7天；C:誘導(dǎo)后14d;D：誘導(dǎo)后28天

粉數(shù)圖1-4誘導(dǎo)后上清液中分泌白蛋白和尿素水平 M BMSCs DHC(7^) DHC(14^) DHC(21^) DH 0(28^)圖1 -5對(duì)照組和誘導(dǎo)分化組HLCs細(xì)胞肝特異性蛋白AFP、ALB .CK-18 mRNA表達(dá)1.2.3 BMMSCs與ConA刺激后的LYM共培養(yǎng)：LYM組：不加入ConA的LYM增殖較慢，可見(jiàn)少量集落團(tuán)，LYM+ConA組：經(jīng)ConA刺激LYM后，見(jiàn)LYM明顯增殖活躍，呈集落增殖，見(jiàn)圖（6; A、C) ； BM MSCs+LYM+ConA組：見(jiàn)增殖集落明顯減少，混合LYM增殖明顯受到抑制，（見(jiàn)圖6; B)。收集培養(yǎng)液上清檢測(cè)TGF-p丨、IL-6水平，其中：BM MSCs+LYM+CcmA組與③ LYM+ConA組相比，TGF-pi水平明顯升高

達(dá)RT-PCR分析表明誘導(dǎo)分化7 d后細(xì)胞表達(dá)AFP基因,ALB基因，表達(dá)逐漸增強(qiáng)。這表明誘導(dǎo)出的多角形貼壁細(xì)胞是分化中的HLCs，（見(jiàn)圖1-5);■■圖1-3體外細(xì)胞因子誘導(dǎo)后BM MSCs細(xì)胞形態(tài)的改變A：誘導(dǎo)前BMMSCs; B誘導(dǎo)后7天；C:誘導(dǎo)后14d; D：誘導(dǎo)后28天1 1

【參考文獻(xiàn)】：
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