目的：進(jìn)一步驗(yàn)證乙肝病毒表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）與烯酰輔酶A水合酶（Enoyl CoAHydratase，ECHS1）之間的相互作用，研究這種相互作用對(duì)宿主細(xì)胞的影響，探討HBsAg的長(zhǎng)期持續(xù)表達(dá)在HBV致病機(jī)制中的作用。方法：采用GST pull-down、免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）、激光共聚焦顯微鏡等多種方法進(jìn)一步驗(yàn)證HBsAg與ECHS1之間的相互作用。應(yīng)用Western blot技術(shù)檢測(cè)瞬時(shí)及穩(wěn)定表達(dá)表面抗原主蛋白（Small hepatitis B surfaceantigen, SHBs）的肝癌細(xì)胞系Huh7細(xì)胞和HepG2細(xì)胞中，ECHS1蛋白表達(dá)水平。流式細(xì)胞分析技術(shù)觀察穩(wěn)定表達(dá)SHBs的HepG2-SHBs細(xì)胞及對(duì)照細(xì)胞HepG2-neo對(duì)Camptothecin誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的敏感性差異。為研究SHBs導(dǎo)致的ECHS1表達(dá)下降是否在SHBs促凋亡中起作用，在HepG2-SHBs細(xì)胞中，利用siRNA技術(shù)下調(diào)ECHS1表達(dá)，或者轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-ECHS1過表達(dá)ECH... 

【文章來(lái)源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖12010年我國(guó)不同地區(qū)的HBsAg攜帶率

LHBs)[10-11]。C 區(qū)基因包括前 C 基因和 C 基因，分別編atitis B core antigen, HBcAg)[12]即內(nèi)衣殼蛋白和 e 抗原(hepatitis eAg)[13]。P 區(qū)基因最長(zhǎng)，約占病毒基因組的 75%以上，編碼病毒錄功能的 DNA 聚合酶蛋白(polymerase)[14]。X 區(qū)編碼 X 蛋白[15]otein, HBx)(見圖 2)。

蛋白、HBcAg、HBeAg 抗原、X 蛋白以及聚合酶蛋白用于包裝新的病毒基因組。HBcAg 組裝成內(nèi)衣殼，內(nèi)衣殼將病毒前基因組 mRNA 與病毒聚合酶蛋白包裹在一起組裝成核衣殼，病毒在核衣殼內(nèi)部進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，在 HBV DNA 多聚酶的反轉(zhuǎn)錄活性作用下，以前基因組 mRNA 為模板，合成負(fù)鏈 DNA，再以負(fù)鏈 DNA 為模板，合成正鏈 DNA，形成子代的部分雙鏈環(huán)狀 DNA，含有子代的部分雙鏈環(huán)狀 DNA 的核衣殼再包上病毒的包膜蛋白，裝配成完整的病毒顆粒[19-21]，以出芽的方式從肝細(xì)胞漿釋放至肝細(xì)胞外，再開始一輪新的感染(見圖 3)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3025419