目的:研究IL-22抑制HSC致肝纖維化的作用和機(jī)制,探索Wnt/β-catenin通路在肝星狀細(xì)胞（HSC）激活過(guò)程中的作用。方法:采用TGF-β1激活HSC,熒光定量PCR和Western blot檢測(cè)細(xì)胞激活過(guò)程中β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表達(dá)變化情況。應(yīng)用不同濃度和不同時(shí)間的重組大鼠IL-22刺激大鼠HSC,CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖率,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。采用TGF-β1預(yù)處理HSC,再用最適濃度IL-22干預(yù),對(duì)比干預(yù)前后HSC增殖情況,并檢測(cè)β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表達(dá)變化情況。結(jié)果:TGF-β1激活HSC后,β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<0.05）。IL-22以濃度依賴(lài)性和時(shí)間依賴(lài)性抑制HSC增殖（P<0.05）,并降低β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表達(dá)水平（P<0.05）,但對(duì)HSC凋亡率無(wú)顯著影響（P>0.05）。IL-22可以顯著抑制TGF-β1誘導(dǎo)的HSC激活,并顯著降低β-catenin、α-SMA的mRNA和蛋白表達(dá)水平（P<0.0... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2017,33(04)北大核心

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TGF-β1促進(jìn)肝星狀細(xì)胞β-catenin和α-SMA表達(dá)Fig．1TGF-β1promotesHSCtosecretβ-cateninand

?.5、5ng/ml濃度的TGF-β1干預(yù)HSC48h，檢測(cè)干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)β-catenin和α-SMA的mRNA和蛋白水平變化，結(jié)果顯示β-catenin和α-SMA的mRNA和蛋白水平均隨著TGF-β1濃度增加而升高，見(jiàn)圖1A、B，提示HSC激活過(guò)程中伴隨著Wnt/β-catenin通路激活和α-SMA表達(dá)改變。圖1TGF-β1促進(jìn)肝星狀細(xì)胞β-catenin和α-SMA表達(dá)Fig．1TGF-β1promotesHSCtosecretβ-cateninandα-SMANote:A.mRNAlevels;B.Proteinlevels;Therewasasignificantdiffer-encesofmRNAandproteinlevelsbetweenthe5ng/mland0ng/mlofTGF-β1group，*.P＜0.05.圖2IL-22抑制肝星狀細(xì)胞增殖Fig．2IL-22inhibitsproliferationofHSCNote:A.Concentrationdependentmanner;B.Timedependentmanner;Thecellproliferationrateswassignificantlydecreasedin750pg/mland1000pg/mlgroupcomparedwith0pg/mlgroup，andalsoremarkablydecreasedin48hgroupcomparedwith12hgroupafterIL-22intervention，*.P＜0.05.2.2IL-22抑制HSC的增殖能力分別使用0、250、500、750、1000pg/ml濃度IL-22干預(yù)HSC48h后，觀察細(xì)胞的增殖情況，結(jié)果顯示HSC增殖率隨著IL-22濃度增加呈下降趨勢(shì)，到750pg/ml時(shí)的細(xì)胞增殖率顯著大于0pg/ml(P＜0.05)，見(jiàn)圖2A;再以1000pg/ml濃度IL-22分別干預(yù)HSC12、24、36、48h，觀察細(xì)胞的增殖和凋亡情況，結(jié)果顯示HSC增殖率隨IL-22濃度增加呈下降趨勢(shì)，在干預(yù)后48h最顯著(P＜0.05)，見(jiàn)圖2B。HSC凋亡率隨著IL-22濃度增加呈升高趨勢(shì)，但各個(gè)濃度組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)圖3A;且IL-22干預(yù)的各時(shí)間段之間細(xì)胞凋亡率差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)圖3B。2.3IL-22抑制TGF-β1激活的HSC的增殖以1000pg/ml濃度IL-22干預(yù)HSC48h后，與未干預(yù)的HSC相比，干預(yù)后HSC增殖率顯

稍ず?8h最顯著(P＜0.05)，見(jiàn)圖2B。HSC凋亡率隨著IL-22濃度增加呈升高趨勢(shì)，但各個(gè)濃度組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)圖3A;且IL-22干預(yù)的各時(shí)間段之間細(xì)胞凋亡率差異亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見(jiàn)圖3B。2.3IL-22抑制TGF-β1激活的HSC的增殖以1000pg/ml濃度IL-22干預(yù)HSC48h后，與未干預(yù)的HSC相比，干預(yù)后HSC增殖率顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);采用5ng/ml濃度的TGF-β1預(yù)處理HSC24h，再給予1000pg/ml濃度的IL-22干預(yù)HSC48h，結(jié)果顯示(見(jiàn)圖4)，TGF-β1干預(yù)HSC后細(xì)胞激活，細(xì)胞增殖率明顯升高;激活后的圖3IL-22不影響肝星狀細(xì)胞凋亡Fig．3IL-22hasnosignificanteffectonapoptosisofHSCNote:A.Differentconcentration;B.Differenttime.圖4不同TGF-β1/IL-22組合干預(yù)HSC后細(xì)胞增殖率變化情況Fig．4CellproliferationratesofHSCtreatedwithdifferentcombinationofTGF-β1andIL-22Note:IL-22significantlyinhibitsproliferationofHSCinbothTGF-β1negativeandpositivegroup，*.P＜0.05.·504·中國(guó)免疫學(xué)雜志2017年第33卷

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Wnt5a作用及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究進(jìn)展[J]. 卜海激,朱明華.  中華病理學(xué)雜志. 2015 (07)
[2]Interleukin-22 ameliorates liver fibrogenesis by attenuating hepatic stellate cell activation and downregulating the levels of inflammatory cytokines[J]. Dong-Hong Lu,Xiao-Yun Guo,Shan-Yu Qin,Wei Luo,Xiao-Li Huang,Mei Chen,Jia-Xu Wang,Shi-Jia Ma,Xian-Wen Yang,Hai-Xing Jiang.  World Journal of Gastroenterology. 2015(05)



本文編號(hào)：3014093