目的肝纖維化是以細(xì)胞外基質(zhì)的過多沉積為特征,細(xì)胞外基質(zhì)的主要來源是激活的肝星狀細(xì)胞。研究表明上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）在其中也起著重要的作用。EMT是指上皮細(xì)胞通過特定程序轉(zhuǎn)化為具有間質(zhì)表型細(xì)胞的生物學(xué)過程,其標(biāo)志為上皮標(biāo)志蛋白表達(dá)下降和間皮標(biāo)志蛋白的表達(dá)升高。小RNA （microRNA,miR）是一類長度約22-28個核苷酸的非編碼小分子RNA,其在轉(zhuǎn)錄后水平和翻譯水平的基因調(diào)控過程中發(fā)揮重要作用,參與了許多生理病理過程的調(diào)節(jié)。我們的前期工作表明miR-21在肝星狀細(xì)胞激活過程中起著重要的作用。本研究的目的是探討miR-21在人肝細(xì)胞株（QSG-7701）EMT中的作用和機(jī)理。方法1.TGF-β1對人肝細(xì)胞EMT的作用。用10ng/mlTGF-β1?刺激人肝細(xì)胞株QSG-7701細(xì)胞1、3、5、7天后,顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)的變化,western blot檢測上皮標(biāo)志蛋白（E-鈣粘蛋白）和間皮標(biāo)志蛋白（N-鈣粘蛋白、波形蛋白）的表達(dá)。2.TGF-β1刺激miR-21的表達(dá)。用10ng/mlTGF-β1?刺激人肝細(xì)胞株... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

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TGF-e1刺激引起肝細(xì)胞上皮標(biāo)志蛋白和間皮標(biāo)志蛋白改變

，0-actin w0tk ipmnId 3d 5d 7d對照組 I 1TGF-0 11-2 TGF-e 1刺激引起肝細(xì)胞上皮標(biāo)志蛋白和間皮標(biāo)志蛋白改變F-e 1刺激人肝細(xì)胞株miR-21的表達(dá)上升。roRNA作為一類非編碼小RNA，常在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控IE基因。它參胞生理病理過程。近來發(fā)現(xiàn)它在臟器纖維化過程中也有一定的作用。1在腎臟、肺臟、心臟等臟器的纖維化過程中起的作用己有相關(guān)文獻(xiàn)前期的工作表明miR-21在肝星狀細(xì)胞的激活中起著重要的作用。但否與肝細(xì)胞EMT有關(guān)系仍不清楚。在本實驗中，用終濃度為lOng/P 1作用QSG-7701細(xì)胞，分別在刺激第1、3、5、7天抽提總RNA，DNA，用Taqman探針法RT-PCR檢測miR-21的表達(dá)情況。結(jié)果示：刺激第5天后，miR-21的表達(dá)較對照組有明顯的升高（*P<0.05)(8 ■, *

的表達(dá)情況，進(jìn)一步證實轉(zhuǎn)染是否成功。結(jié)果顯示miR-21抑制劑組較陰性對照組miR-21的表達(dá)明顯下降（*P<0.05)(圖3-1)。1-4 ： 木I IC 1-2 1 TI 士>。.6 ^ miM。4 “ iir j‘。2 E1 dn —TGF- 0 1+陰性對照TGF- e l"hniR-21抑制劑圖3-1轉(zhuǎn)染miR-21抑制劑后miR-21的表達(dá)2.MiR-21 介導(dǎo)了 TGF- P 1 的 EMT 作用。轉(zhuǎn)染lOOnM miR-21抑制劑沉默miR-21后，用TGF-P 1刺激人肝細(xì)胞株QSG-7701 5天，用顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，用western blot檢測轉(zhuǎn)染組及對照組上皮標(biāo)志蛋白（E4丐粘蛋白）和間皮標(biāo)志蛋白（N-韓粘蛋白、波形蛋白）。結(jié)果顯示：(1)形態(tài)改變：miR-21抑制劑組較對照組性狀更圓鈍，觸角更少，排列更緊密(圖 3-2)。(2)上皮細(xì)胞標(biāo)志蛋白（E-I丐粘蛋白）：miR-21抑制劑組較對照組表達(dá)升高（圖3-3)。(3)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志蛋白（N-韓粘蛋白、波形蛋白）：miR-21抑制劑組較對照組表達(dá)下降（圖3-3)。以上結(jié)果提示下調(diào)miR-21表達(dá)后，部分阻斷了 TGF-e 1致肝細(xì)胞EMT作用。28


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