發(fā)布時(shí)間：2021-01-21 13:13

　　目的:通過建立人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞（human umbilical cord mesenchymal stem cells,huc MSCs）修復(fù)葡聚糖硫酸鈉（Dextran Sulfate Sodium Salt,DSS）誘導(dǎo)的小鼠炎癥性腸�。╥nflammatory bowel disease,IBD）模型以及白喉毒素（diphtheria toxin,DT）誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞清除模型,明確巨噬細(xì)胞在huc MSCs修復(fù)IBD中的作用,探討huc MSCs調(diào)控巨噬細(xì)胞修復(fù)IBD的作用機(jī)制,以提高h(yuǎn)uc MSCs治療IBD的療效。方法:1)將純合子CD11b-DTR轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行配籠繁殖,使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)和瓊脂糖凝膠電泳技術(shù)篩選出純合子小鼠用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2)選取6周雄性CD11b-DTR轉(zhuǎn)基因小鼠,預(yù)先饑餓24h后腹腔注射DT（給藥濃度為25ng/g）以構(gòu)建巨噬細(xì)胞清除模型。24h后提取小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,進(jìn)行F4/80、CD11b抗體染色,并使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)F4/80、CD11b雙陽性細(xì)胞,分析其比率。3)選取6周、20g左右的雄性CD11b-DTR轉(zhuǎn)基因小鼠,飲用含3%D... 

【文章來源】：江蘇大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

建立巨噬細(xì)胞清除模型

江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文組小鼠巨噬細(xì)胞清除后，小鼠體重減輕程度明顯提高（圖 2.2B）但 DAI 有所降低，第七天后 DSS 組小鼠便血明顯加�。▓D 2.2C）。DT+DSS 組小鼠結(jié)直腸長度與 DSS 組相比無顯著差異，但脾臟體積略小于 DSS 組（圖 2.2D）。同時(shí) H&E染色結(jié)果顯示，DSS 組小鼠腸黏膜和脾臟結(jié)節(jié)結(jié)構(gòu)均十分紊亂，而 DT 處理后，DSS 誘導(dǎo)的 IBD 小鼠其結(jié)直腸組織和脾臟結(jié)節(jié)結(jié)構(gòu)完整性均得到一定程度的重建，但紊亂依然存在（圖 2.2E）。上述結(jié)果證明，巨噬細(xì)胞清除后 DSS 誘導(dǎo)的IBD 發(fā)生發(fā)展會(huì)有所改變。

HucMSCs 調(diào)控巨噬細(xì)胞 15-LOX-1 表達(dá)促進(jìn)炎癥性腸病修復(fù)的機(jī)制研究Figure 2.2 Macrophage depletion affected the development of DSS induced IBD The design of model group. (B) The body weight loss of mice in each group, ***P<0.001. (C DAI of mice in each group, ***P<0.001. (D) The colon lengths and spleen size of mice in group. (E) H&E staining of the tissues of mice (100×)..3. 巨噬細(xì)胞清除影響 IBD 小鼠結(jié)直腸、脾臟炎癥因子表達(dá)水平上述結(jié)果在組織學(xué)水平證明了巨噬細(xì)胞清除會(huì)影響 IBD 的發(fā)生發(fā)展。為進(jìn)驗(yàn)證這一結(jié)論，使用 qRT-PCR 進(jìn)一步檢測(cè)了各組小鼠結(jié)直腸與脾臟中炎癥(TNF-α、IL-1β、IL-6）表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，巨噬細(xì)胞清除后，IBD結(jié)直腸與脾臟中大部分炎癥因子的表達(dá)有所降低。綜上所述，巨噬細(xì)胞清除然炎癥依然存在，但 DSS 誘導(dǎo)的 IBD 有所緩解，其發(fā)生發(fā)展有所改變。換，巨噬細(xì)胞參與了 DSS 誘導(dǎo)的 IBD 的發(fā)生發(fā)展。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Mesenchymal stem cells-derived exosomal microRNAs contribute to wound inflammation[J]. Dongdong Ti,Haojie Hao,Xiaobing Fu,Weidong Han.  Science China（Life Sciences）. 2016(12)
[2]Diet and nutritional factors in inflammatory bowel diseases[J]. Danuta Owczarek,Tomasz Rodacki,Renata Domaga?a-Rodacka,Dorota Cibor,Tomasz Mach.  World Journal of Gastroenterology. 2016(03)



本文編號(hào)：2991230