目的1.用HBV基因組編碼HBsAg的堿基序列替換WHV基因組中相應(yīng)的同源序列,構(gòu)建WHV-HBV嵌合病毒可復(fù)制性克隆。2.通過尾靜脈高壓水注射的方法,建立WHV-HBV嵌合病毒持續(xù)復(fù)制小鼠模型。了解WHV-HBV嵌合小鼠體內(nèi)的免疫應(yīng)答,探索持續(xù)復(fù)制的機(jī)制。3.研究HBsAg DNA疫苗在WHV-HBV嵌合病毒小鼠模型上的免疫保護(hù)效力。方法1.以本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的pBS-WHV1.3和pBS-HBV1.3為模板,利用分子克隆技術(shù),用HBV基因組中編碼S區(qū)”a”抗原決定簇、Major HBsAg, Middle HBsAg的堿基序列替換WHV基因組中對應(yīng)的同源序列。構(gòu)建成功的嵌合WHV-HBV質(zhì)粒,通過體外轉(zhuǎn)染Huh7、HepG2細(xì)胞,酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞上清中的HBsAg。2.采用高壓尾靜脈注射的方式將pBS-WHV1.3、 WHV-HBV-Sa、 WHV-HBV-SS、 WHV-HBV-MS克隆轉(zhuǎn)染到BALB/c小鼠肝臟內(nèi),定期采集小鼠血清和肝臟標(biāo)本,通過酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)、PCR、Southern Blot及免疫組織化學(xué)染色等方法監(jiān)測小鼠體內(nèi)病毒血癥。尾靜脈注射36... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：106 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 構(gòu)建WHV-HBV嵌合病毒復(fù)制性克隆
    1 材料
    2 方法
    3. WHV-HBV嵌合質(zhì)粒體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    結(jié)果
    小結(jié)
    討論
第二部分 建立WHV-HBV嵌合病毒尾靜脈高壓水注射持續(xù)復(fù)制小鼠模型
    1 材料
    2 方法
    結(jié)果
    小結(jié)
    討論
第三部分 HBsAg DNA疫苗對嵌合病毒基因組的清除作用
    材料與方法
    結(jié)果
    小結(jié)
    討論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：2980312