目的:自身免疫性肝炎（AIH）的形成和發(fā)展是模擬抗原在自身免疫耐受減弱的情況下誘發(fā)自身免疫應(yīng)答,從而導(dǎo)致慢性的肝臟炎癥和纖維化。在AIH發(fā)病過程中,肝臟自身免疫耐受能力減弱的機制尚不清楚。本文擬研究腺病毒（Ad）和四氯化碳（CCl₄）誘發(fā)的非AIH炎癥,是否能夠促進(jìn)模擬抗原誘發(fā)自身免疫應(yīng)答和AIH,并探討相關(guān)的免疫調(diào)節(jié)機制。方法:（1）尾靜脈注射Ad、pCYP2D6、Ad/pCYP2D6、腹腔注射CCl₄并用CCl₄/pCYP2D6處理C57/BL6小鼠,HE染色檢測肝組織中炎癥細(xì)胞浸潤;Real-time PCR檢測肝組織中炎癥相關(guān)基因Il1b、Il6和Tnfa的表達(dá);觀察Ad、CCl₄及CYP2D6單獨作用在第5天、10天和15天時,是否能引起肝臟非AIH炎癥;在第28天時,觀察Ad/pCYP2D6或CCl₄/pCYP2D6實驗組中是否有自身抗體產(chǎn)生。在非AIH炎癥期間,尾靜脈注射psTLR2/4質(zhì)粒,封閉體內(nèi)的TLR2/4的配體,Real-time PCR檢測肝組織中炎癥... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

動物實驗流程圖

我們首先分別通過尾靜脈注射腺病毒（Ad）、模擬抗原人 CYP2D6 和腹腔注射四氯化碳（CCl4）處理小鼠（圖 1-1）。HE 染色檢測了肝臟淋巴細(xì)胞浸潤及炎癥情況，結(jié)果顯示，與 Naive 對照組相比較，Ad 及 CCl4都能有效的誘導(dǎo)肝臟炎癥的產(chǎn)生，然而，僅在肝臟轉(zhuǎn)染表達(dá)模擬抗原人 CYP2D6 卻無法引起肝臟炎癥（圖 1-2）。圖 1-1：動物實驗流程圖按圖所示時間點，小鼠尾靜脈注射腺病毒 Ad（109pfu）、重組質(zhì)粒 pCYP2D6（50 μg/次）以及 psTLR2/（100 μg/次），腹腔重復(fù)注射 CCl4（1 ml/kg）。

YP2D6 在肝臟中的表達(dá)水平（圖 1-5），但是卻能引起肝臟產(chǎn)生針對 CYP2D6體（anti-CYP2D6）和針對正常肝蛋白（hepatic protein，HP）的自身抗體（anti-HP而，單獨在肝臟中轉(zhuǎn)染表達(dá) CYP2D6 只針對模擬抗原 CYP2D6 產(chǎn)生低滴度的，針對正常肝蛋白卻無自身抗體產(chǎn)生（圖 1-6）。為了探索 TLR2/4 配體在炎癥產(chǎn)生和誘導(dǎo)自身免疫應(yīng)答中的作用，我們通過轉(zhuǎn)染的方法，在肝臟中轉(zhuǎn)染表達(dá)了 TLR2/4 可溶性的受體（sTLR2/4）, 以此來相應(yīng)的配體[40]。熒光定量PCR結(jié)果顯示，當(dāng)用TLR2/4可溶性受體封閉了TLR號后抑制了由 Ad 及 CCl4誘導(dǎo)的肝臟炎癥反應(yīng)，相應(yīng)的炎癥基因 Il1b、Il6 和 T表達(dá)上調(diào)被抑制（圖 1-7）。重要的是，當(dāng)我們用可溶性受體（sTLR2/4）封閉R2/4 的信號后，則抑制了抗 CYP2D6 抗體和抗自身肝蛋白抗體的產(chǎn)生（圖 1-8綜合以上所述結(jié)果，我們推測由 Ad 及重復(fù)注射 CCl4引起的持續(xù)肝臟非 A癥導(dǎo)致了 TLR2/4 配體的釋放，而釋放的 TLR2/4 配體活化免疫細(xì)胞分泌促炎因子，這些細(xì)胞因子促進(jìn)模擬抗原啟動自身免疫應(yīng)答。


本文編號：2975804