發(fā)布時間：2021-01-13 03:36

　　肝細胞性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是人類最常見的惡性腫瘤之一,在許多地區(qū)尤其是非洲和亞洲,乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）的感染被認為是HCC發(fā)生的一個高危因素,許多慢性HBV感染者最終發(fā)生嚴重的肝臟疾病包括慢性肝炎、肝硬變和肝細胞癌,這些疾病目前每年導致約75萬人死亡。HBV感染后不同個體對HBV的自發(fā)清除能力有很大的差異,青少年和成年人在感染HBV后大部分個體能產(chǎn)生強大的抗病毒反應,最終清除病毒;而小部分（大約5%-10%）不能清除病毒而轉(zhuǎn)變?yōu)槁圆《緮y帶者,或進一步發(fā)展為慢性肝炎;新生兒在感染HBV后90%以上發(fā)展為慢性肝炎。已知HBV的清除是由一種包括干擾素和其他一些細胞因子在內(nèi)的非溶細胞機制所介導,但干擾素誘導的HBV DNA清除的確切機制現(xiàn)在還不清楚。載脂蛋白B mRNA編輯酶催化多肽樣蛋白3（apolipoprotein BmRNA-editing catalytic polypeptide-like protein 3,APOBEC3）是哺乳動物所特有的胞嘧啶脫氨酶,目前已發(fā)現(xiàn)至少有7個成員:A3A、A3B... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

A3B一H習伴DN戶己.1質(zhì)粒圖譜

取州自材153盆勁倫怕”公，1王‘創(chuàng)陽念為i圖1一 2pGLZ一basic和psv-壓galactosidase載體的環(huán)狀圖譜Figl一 2MaPofPGLZ· basieandPSv-B一galactosid王記PlasmidsA.PGLZ一 basicB.PsV一壓gal朗tosid斑姆223熒光素酶活性分析上述多個含熒光素酶報告基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞48hr后，PBS洗兩次，用80ul裂解緩沖液裂解細胞。裂解完全后轉(zhuǎn)移到 0.sulEP管中，振蕩器上振蕩15秒，離心后吸取上清一80℃保存待測。應用Lucifen處姆 Assaysystem‘ t(Promega公司)分析熒光素酶活性:取20川上清至%孔板的孔中，迅速每孔加入100川熒光素酶底物，10秒內(nèi)在酶標儀 MultilabelCounte:(場人 LLAC1420)上測其發(fā)光值。另取30川上清用于p一半乳糖昔酶酶活力測試，操作參照試劑盒說明書進行。酶標儀上讀取450lun的吸光度值

LlAPOBEC3一H刀PcDNA3.1質(zhì)粒在細胞內(nèi)表達的鑒定:A3B一H刀peDNA3.1真核表達質(zhì)粒經(jīng)Hindln和Notl限制酶酶切鑒定條帶大小正確(見圖1一3)，純化產(chǎn)物經(jīng)DNA測序證實序列正確，說明A3B一HA/peDNA3.l真核表達質(zhì)粒構建成功。A3A一HA/pcDNA3.l，A3e一HA/peoNA3.l，A3F一 HA/PcDNA3.1和A3G一HA/peDNA3.1真核表達質(zhì)粒也經(jīng)DNA測序證實序列正確。為驗證各質(zhì)粒是否能正確表達出蛋白，我們分別用各APOBEC3一HA/pcDNA3.l真核表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepGZ細胞，通過 WestemBlot方法用抗HA抗體檢測相應蛋白的表達，結(jié)果如圖1一4所示

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Inhibition of hepatitis B virus replication by APOBEC3G in vitro and in vivo[J]. Yan-Chang Lei, You-Hua Hao, Zheng-Mao Zhang, Bao-Ju Wang, Dong-Liang Yang, Division of Clinical Immunology, Department of Infectious Diseases, Tongji Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China Yong-Jun Tian, Yan Yang, Dong-Liang Yang, Center of Experimental Medicine, Tongji Hospital of Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China Meng-Ji Lu, Department of Microbiology, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China Fei-Li Gong, Department of Immunology, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2006(28)



本文編號：2974135