肝纖維化是各種病因的慢性肝損傷的共同轉(zhuǎn)歸,是全世界共同的公眾健康威脅。早期發(fā)現(xiàn)肝纖維化并進(jìn)行積極的干預(yù),將可以很大程度控制甚至逆轉(zhuǎn)肝纖維化。但是,目前還沒有一種有效的早期肝纖維化無創(chuàng)評估方法。眾多的研究已經(jīng)證實肝星狀細(xì)胞是肝纖維化過程中肝臟纖維發(fā)生的主要效應(yīng)細(xì)胞。肝纖維化時,隨著HSCs激活增殖、肝內(nèi)血管新生,肝組織的整合素αvβ3表達(dá)水平上調(diào)。αvβ3是整合素蛋白中的ECM （extracellular matrix,細(xì)胞外基質(zhì)）受體。它介導(dǎo)細(xì)胞和多種ECM黏附,并和細(xì)胞因子協(xié)同作用,是組織損傷修復(fù)和基質(zhì)重塑的重要因素。精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸（arginine-glycine-asparagic acid, RGD）是對整合素高度靶向性配基的最常見識別位點。而精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸-（右旋）酪氨酸-賴氨酸（RGDyK）、精氨酸-甘氨酸-天門冬氨酸-（右旋）苯丙氨酸-賴氨酸（RGDfK）等環(huán)肽表現(xiàn)出較線狀肽更好的和整合素αvβ3受體特異結(jié)合的能力。分子影像學(xué)是用影像技術(shù)在活體內(nèi)進(jìn)行細(xì)胞和分子水平的生物過程的描述和測量的科學(xué)。目前分子影像學(xué)發(fā)展迅速,各種方法各有優(yōu)點。將MR和光學(xué)成... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：144 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
英文縮略語
中文摘要
Abstract
前言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 靶向多模態(tài)納米探針的設(shè)計、合成和表征
    1. 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 實驗設(shè)計
vβ₃多模態(tài)納米探針的合成">        1.3 靶向整合素α_vβ₃多模態(tài)納米探針的合成
        1.4 測定熒光探針的比例
        1.5 用SDS-PAGE凝膠電泳驗證納米探針的均一性和熒光基團(tuán)的結(jié)合
        1.6 用MALDI-TOF MS測定納米探針的分子量
        1.7 用凝膠滲透色譜法測定分子量
        1.8 納米探針粒徑分布和Zeta電位的測定
3+含量">        1.9 用ICP-AES測定納米探針中的Gd³⁺含量
        1.10 檢測納米探針的馳豫率
    2. 結(jié)果
        2.1 cRGDyK的制備與表征
        2.2 化合物1的表征
        2.3 化合物2的表征
        2.4 化合物6的表征
        2.5 化合物7的表征
        2.6 熒光探針的比例
        2.7 產(chǎn)率
        2.8 納米探針的均一性和熒光基團(tuán)的結(jié)合
        2.9 MALDI-TOF MS測定納米探針的分子量
        2.10 用凝膠滲透色譜法（GPC）測定分子量
        2.11 納米探針粒徑分布和Zeta電位
3+含量">        2.12 納米探針中的Gd³⁺含量
        2.13 納米探針的馳豫率
        2.14 納米探針和G5-Dendrimer的各項參數(shù)
    3. 討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 體外細(xì)胞實驗驗證納米探針的細(xì)胞毒性和體外靶向作用
    1. 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 所有的動物實驗都依照復(fù)旦大學(xué)倫理委員會評估和認(rèn)可的指南進(jìn)行
        1.3 配液
        1.4 小鼠HSCs的分離
        1.5 小鼠HSCs活率、得率、細(xì)胞傳代和培養(yǎng)
        1.6 小鼠HSCs的鑒定
        1.7 G5-Dendrimer及各種納米探針對小鼠原代HSCs細(xì)胞的毒性實驗
3受體的表達(dá),并與高表達(dá)整合素α_vβ₃受體的U87MG細(xì)胞比較">        1.8 Western blot檢測小鼠原代HSC活化后β₃受體的表達(dá),并與高表達(dá)整合素α_vβ₃受體的U87MG細(xì)胞比較
        1.9 流式細(xì)胞儀檢測靶向納米探針和小鼠原代活化HSCs細(xì)胞的結(jié)合
        1.10 共聚焦顯微鏡觀測不同條件下探針在小鼠原代活化HSCs內(nèi)的分布
        1.11 統(tǒng)計
    2. 結(jié)果
        2.1 得率和活性
        2.2 光學(xué)顯微鏡觀察
        2.3 油紅O染色
        2.4 Desmin和α-SMA染色
        2.5 兩種納米探針對小鼠原代HSCs的毒性
        2.6 Wester blot結(jié)果
        2.7 流式細(xì)胞儀檢測靶向納米探針和小鼠原代活化HSCs細(xì)胞的結(jié)合
        2.8 共聚焦顯微鏡觀測不同條件下探針在小鼠原代活化HSCs內(nèi)的分布
    3. 討論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 TAA誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化模型的建立及靶向納米探針在模型體內(nèi)的生物分布
    1. 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 動物模型的建立和鑒定
125I-Den-RGD和¹²⁵I-Den-PEG的制備">        1.3 ¹²⁵I-Den-RGD和¹²⁵I-Den-PEG的制備
125I-Den-RGD和¹²⁵I-Den-PEG的分布">        1.4 模型小鼠體內(nèi)¹²⁵I-Den-RGD和¹²⁵I-Den-PEG的分布
        1.5 肝組織放射自顯影分析
        1.6 統(tǒng)計
    2. 結(jié)果
        2.1 小鼠肝臟H&E染色和鏡下肝臟炎癥活動度分級及纖維化分期
        2.2 小鼠肝臟天狼星紅染色及計算機(jī)圖像分析結(jié)果
125I-Den-RGD在肝臟內(nèi)的分布顯著增加">        2.3 模型小鼠體內(nèi)¹²⁵I-Den-RGD在肝臟內(nèi)的分布顯著增加
        2.4 24h肝組織放射自顯影
    3. 討論
    參考文獻(xiàn)
第四部分 用光學(xué)方法追蹤靶向多模態(tài)納米探針的分布
    1. 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 動物模型的建立
        1.3 正常及不同造模時間模型小鼠活體及肝臟的離體近紅外熒光光學(xué)顯像
        1.4 正常及不同造模時間模型小鼠肝臟的冰凍切片免疫熒光染色
    2. 結(jié)果
        2.1 正常及不同造模時間模型小鼠活體及肝臟的離體近紅外熒光光學(xué)顯像
        2.2 正常及不同造模時間模型小鼠肝臟的冰凍切片免疫熒光染色
    3. 討論
    參考文獻(xiàn)
第五部分 磁共振無創(chuàng)評估模型小鼠肝纖維化的初步研究
    1. 材料和方法
        1.1 材料
        1.2 動物模型的建立
        1.3 小鼠肝臟的MRI成像
    2. 結(jié)果
        2.1 正常小鼠磁共振結(jié)果
        2.2 模型4周小鼠磁共振結(jié)果
        2.3 模型8周小鼠磁共振結(jié)果
        2.4 模型12周小鼠磁共振結(jié)果
        2.5 正常小鼠和不同造模時間模型小鼠注射Den-RGD后,肝臟T1加權(quán)的MR信號隨時間變化的對比
        2.6 模型小鼠肝磁共振成像圖的減影圖
    3. 討論
    參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
綜述:肝纖維化的分子機(jī)制
    參考文獻(xiàn)
博士期間發(fā)表或者擬發(fā)表的論文和專利
致謝



本文編號：2965646