肝臟由于其特殊的生理位置和血液供應,易于受到多種外界因素的刺激,進而發(fā)生肝臟損傷。肝臟長時期處于損傷-恢復的狀態(tài),往往會導致肝纖維化的發(fā)生。肝纖維化（hepatic fibrosis）是慢性肝病長期發(fā)展后的必然過程。其疾病特征是以膠原為主的細胞外基質（extracellular matrix,ECM）在肝內沉積,造成肝小葉結構改建、假小葉和結節(jié)形成,嚴重的肝纖維化可以發(fā)展為肝硬化,乃至肝功能衰竭。近來研究認為,肝纖維化屬可逆性病變。如果能夠去除損傷因素,隨著時間的變化,肝纖維化是可以自然恢復的,表現(xiàn)為沉積的膠原降解,肝臟結構和肝臟功能的恢復。文獻報道,在肝纖維化形成及恢復階段,Kupffer細胞發(fā)揮了雙刃劍的作用。在肝纖維化進展期可促進HSC的激活,促進肝纖維化的形成;在肝纖維化恢復期能促進活化的HSC失活、凋亡,促進ECM的降解,從而抑制肝纖維化的形成。然而,Kupffer細胞在肝纖維化恢復期誘導HSC凋亡的研究較少,其作用的細胞因子、細胞信號傳導通路目前尚不清楚。為了進一步揭示肝纖維化恢復過程中Kupffer細胞的作用,我們擬通過分離肝纖維化恢復模型大鼠的Kupffer細胞來進行相... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學安徽省

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

大鼠肝組織病理學檢測(HE染色)

AB圖3 恢復期KCCM對活化HSC的作用。（A）BrdU細胞增殖實驗。（B）細胞凋亡實驗。Fig.3. Effect of recovery KCCM on activated HSCs. (A) BrdU cell proliferation assays. (B) Cellapoptosis assays. Results are the mean ± S.D. from three independent experiments. #P < 0.01 versusserum control values; *P < 0.05, **P < 0.01 versus recovery KCCM values.3.2 恢復期KCCM誘導HSC凋亡依賴caspase途徑PARP是caspase-3的底物，當caspase-3活化時PARP被剪切，因此檢測PARP的剪切程度是檢測caspase-3活化的一個重要指標。為檢測恢復期KCCM誘導HSC是否39

胞的 FasL 和 TNF-α 表達水平?jīng)]有明顯改變；而恢復期 Kupffer 細胞的 TRAIL 表達水平明顯升高（圖 5）。利用 RNA 干涉實驗進一步證明 TRAIL 在恢復期 KCCM 誘導HSC 凋亡中的作用。通過與 TRAIL 表達質粒（pcDNA3.1a-TRAIL）共轉染，利用Western blot 篩選出能夠有效干涉 TRAIL 表達的 siRNA。結果顯示，2′siRNA 和3′ siRNA 均能有效抑制 TRAIL 表達（圖 6A）。在恢復期 Kupffer 細胞中轉染 3′siRNA 能明顯降低 TRAIL 的表達（圖 6B）。用 3′ siRNA 轉染恢復期 Kupffer 細胞制備的 KCCM（3′ siRNA KCCM）刺激培養(yǎng)活化的 HSC，HSC 的凋亡率與對照組相比顯著降低（圖 6C）。結果表明，在恢復期 KCCM 誘導 HSC 凋亡中 TRAIL 發(fā)揮重要作用。


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