近年來,隨著生活生平的提高和生活習(xí)慣的改變,非酒精性脂肪性肝�。∟onalcoholic fatty liver disease, NAFLD）的患病率逐年升高,已成為全球性的公共衛(wèi)生問題。NAFLD的疾病譜包括單純性脂肪肝、脂肪性肝炎及其相關(guān)肝硬化、肝細(xì)胞肝癌等。NAFLD的發(fā)生發(fā)展與肥胖、2型糖尿病、高血壓等代謝性疾病關(guān)系密切,是遺傳-環(huán)境-代謝應(yīng)激相關(guān)性疾病,但其確切的發(fā)病機(jī)制并未明確。經(jīng)典的“二次打擊”學(xué)說并不能完全解釋NAFLD的全部機(jī)制。NAFLD的發(fā)生是肝細(xì)胞不斷貯積脂質(zhì)的過程,從肝細(xì)胞脂質(zhì)貯積的分子機(jī)制入手,將為NAFLD的發(fā)病機(jī)制研究提供新線索。肝細(xì)胞脂質(zhì)貯積主要與脂質(zhì)攝取、合成、分泌以及氧化清除相關(guān)。微囊蛋白1（Caveolin-1）是微囊的主要結(jié)構(gòu)蛋白,也是一個(gè)多功能的信號(hào)蛋白。結(jié)合文獻(xiàn)閱讀和前期研究,我們推測(cè)caveolin-1的表達(dá)缺失可能通過增加脂肪酸攝取與合成,促進(jìn)脂質(zhì)貯積、介導(dǎo)炎癥反應(yīng),加速NAFLD的發(fā)生發(fā)展。我們利用NAFLD小鼠和細(xì)胞模型,應(yīng)用最新的基因編輯技術(shù)-CRISRP/Cas9系統(tǒng)以及重組慢病毒技術(shù),干預(yù)caveolin-1表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)：... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

NAFLD中異常脂質(zhì)Jfc積的病理生理機(jī)制[33]

酶既定了泛素化通路底物的特異性，因此傭選脂質(zhì)It積相關(guān)E3連接酶，有現(xiàn)NAFLD中脂質(zhì)代謝異常通路，開發(fā)潛在藥物，具有重大的生物學(xué)意義應(yīng)。制備caveolin-1和E3連接酶表達(dá)干預(yù)模型是開展其在NAFLD脂質(zhì)j!&究的基碰。RNA干擾技術(shù)通過阻礙mRNA翻譯降低基因表達(dá)，是常見的，但其致命缺點(diǎn)是無法徹底消除基因表達(dá)，而很多蛋白，尤其是酶活性蛋連接酶），其殘余的表達(dá)往往足以發(fā)揮其活性，滿足機(jī)體對(duì)它的功能需求。A干擾的效果不能長時(shí)間持續(xù)，我們?cè)谇捌趯?shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，腺病毒介導(dǎo)的sh達(dá)和caveolin-1基因在肝臟的沉默效果只能持續(xù)10天左右（圖2 )，而N鼠模型的誘導(dǎo)常常需要更久的時(shí)間。而反復(fù)多次注射腺病毒介導(dǎo)的shRN造成小鼠尾部損傷，還可誘發(fā)機(jī)體免疫清除，導(dǎo)致caveolin-1敲低小鼠N型構(gòu)建失敗。

圖3. CRISPR/Cas9系統(tǒng)示意圖網(wǎng)Cas9蛋白在sgRNAs的指導(dǎo)下對(duì)鞔位點(diǎn)進(jìn)行切割，造成DNA雙鏈斷裂(doublestrand break, DSB )，細(xì)胞會(huì)立刻對(duì)DSB進(jìn)行修復(fù)。在沒有同源序列存在的情況下，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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