近年來,隨著生活生平的提高和生活習慣的改變,非酒精性脂肪性肝病（Nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD）的患病率逐年升高,已成為全球性的公共衛(wèi)生問題。NAFLD的疾病譜包括單純性脂肪肝、脂肪性肝炎及其相關肝硬化、肝細胞肝癌等。NAFLD的發(fā)生發(fā)展與肥胖、2型糖尿病、高血壓等代謝性疾病關系密切,是遺傳-環(huán)境-代謝應激相關性疾病,但其確切的發(fā)病機制并未明確。經典的“二次打擊”學說并不能完全解釋NAFLD的全部機制。NAFLD的發(fā)生是肝細胞不斷貯積脂質的過程,從肝細胞脂質貯積的分子機制入手,將為NAFLD的發(fā)病機制研究提供新線索。肝細胞脂質貯積主要與脂質攝取、合成、分泌以及氧化清除相關。微囊蛋白1（Caveolin-1）是微囊的主要結構蛋白,也是一個多功能的信號蛋白。結合文獻閱讀和前期研究,我們推測caveolin-1的表達缺失可能通過增加脂肪酸攝取與合成,促進脂質貯積、介導炎癥反應,加速NAFLD的發(fā)生發(fā)展。我們利用NAFLD小鼠和細胞模型,應用最新的基因編輯技術-CRISRP/Cas9系統(tǒng)以及重組慢病毒技術,干預caveolin-1表達。研究發(fā)現：... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

NAFLD中異常脂質Jfc積的病理生理機制[33]

酶既定了泛素化通路底物的特異性，因此傭選脂質It積相關E3連接酶，有現NAFLD中脂質代謝異常通路，開發(fā)潛在藥物，具有重大的生物學意義應。制備caveolin-1和E3連接酶表達干預模型是開展其在NAFLD脂質j!&究的基碰。RNA干擾技術通過阻礙mRNA翻譯降低基因表達，是常見的，但其致命缺點是無法徹底消除基因表達，而很多蛋白，尤其是酶活性蛋連接酶），其殘余的表達往往足以發(fā)揮其活性，滿足機體對它的功能需求。A干擾的效果不能長時間持續(xù)，我們在前期實驗中發(fā)現，腺病毒介導的sh達和caveolin-1基因在肝臟的沉默效果只能持續(xù)10天左右（圖2 )，而N鼠模型的誘導常常需要更久的時間。而反復多次注射腺病毒介導的shRN造成小鼠尾部損傷，還可誘發(fā)機體免疫清除，導致caveolin-1敲低小鼠N型構建失敗。

圖3. CRISPR/Cas9系統(tǒng)示意圖網Cas9蛋白在sgRNAs的指導下對鞔位點進行切割，造成DNA雙鏈斷裂(doublestrand break, DSB )，細胞會立刻對DSB進行修復。在沒有同源序列存在的情況下，

【參考文獻】：
期刊論文
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