終末期肝病是由多種急慢性肝病導(dǎo)致的臨床綜合征。應(yīng)用干細(xì)胞再生產(chǎn)生正常肝細(xì)胞代謝功能的“肝臟組織”,進(jìn)行體外支持或體內(nèi)植入,可以解決肝臟來源的疑難。脂肪間充質(zhì)細(xì)胞（ADSCs）作為自體細(xì)胞移植的種子細(xì)胞在再生醫(yī)學(xué)中發(fā)揮著重要作用。由于能在體外培養(yǎng)穩(wěn)定擴(kuò)增,并在體內(nèi)和體外分化成為肝細(xì)胞,ADSCs可以作為自體干細(xì)胞治療肝臟疾病的種子細(xì)胞。Caveolin-1（窖蛋白-1,Cav-1）是組成胞膜窖的主要功能蛋白。由于在脂滴和新生細(xì)胞膜的形成以及肝再生的能量供應(yīng)中發(fā)揮著重要作用,因此是Cav-1肝再生所必需的蛋白。然而,Cav-1是否參與并影響ADSCs向肝細(xì)胞分化這一過程尚不明確。目的：本論文以人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,利用生長因子聯(lián)合誘導(dǎo)技術(shù)建立肝樣細(xì)胞模型,通過檢測干細(xì)胞向肝樣細(xì)胞誘導(dǎo)過程中Cav-1蛋白的表達(dá),初步探討Cav-1在肝樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中的作用及介導(dǎo)的相關(guān)信號(hào)途徑,旨在了解干細(xì)胞向肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化的機(jī)制。方法：1、分離、提取及培養(yǎng)人源脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞并鑒定其性質(zhì)。2、通過HGF、bFGF、EGF和Dex聯(lián)合誘導(dǎo),免疫熒光及RT-PCR方法對(duì)誘導(dǎo)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。3、體外MR... 

【文章來源】：遼寧師范大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
    論文選題意義
    研究目的及內(nèi)容
1 文獻(xiàn)綜述肝臟干細(xì)胞組織工程研究進(jìn)展及應(yīng)用前景展望
    1.1 肝臟干細(xì)胞
        1.1.1 胚胎肝臟干細(xì)胞
        1.1.2 成體肝臟干細(xì)胞
        1.1.3 非肝源性干細(xì)胞
    1.2 肝臟干細(xì)胞體外擴(kuò)增的有效手段——三維培養(yǎng)
        1.2.1 支架材料
        1.2.2 生物反應(yīng)器
        1.2.3 肝臟干細(xì)胞移植體內(nèi)定植的理想方式——肝臟干細(xì)胞可降解支架在生物反應(yīng)器內(nèi)形成的復(fù)合體
    1.3 展望
2 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離、提取及向肝樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化
    2.1 前言
    2.2 材料與儀器
        2.2.1 新鮮的脂肪組織
        2.2.2 主要儀器
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)
        2.3.2 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞傳代及擴(kuò)增
        2.3.3 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞生長曲線的檢測
        2.3.4 流式細(xì)胞儀檢測人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的表型
        2.3.5 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞的誘導(dǎo)及鑒定
        2.3.6 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)及鑒定
        2.3.7 人脂肪干細(xì)胞向肝細(xì)胞的誘導(dǎo)
        2.3.8 免疫熒光法檢測AFP、ALB蛋白的表達(dá)
        2.3.9 RT-PCR檢測肝細(xì)胞特異性基因的表達(dá)
        2.3.10 Elias檢測誘導(dǎo)后細(xì)胞上清液尿素含量
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的形態(tài)觀察
        2.4.2 原代培養(yǎng)第3代人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖情況
        2.4.3 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞表型的檢測
        2.4.4 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨、成脂細(xì)胞的分化潛能
        2.4.5 不同誘導(dǎo)時(shí)期細(xì)胞ALB、AFP蛋白的表達(dá)
        2.4.6 不同誘導(dǎo)時(shí)期分化標(biāo)志性基因的表達(dá)
        2.4.7 不同誘導(dǎo)時(shí)期尿素含量的表達(dá)
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
3 超順磁性氧化鐵對(duì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記的體外研究
    3.1 前言
    3.2 材料與儀器
        3.2.1 細(xì)胞
        3.2.2 干細(xì)胞標(biāo)記物
        3.2.3 主要試劑
        3.2.4 主要儀器
    3.3 方法
        3.3.1 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)、擴(kuò)增及鑒定
        3.3.2 標(biāo)記后細(xì)胞存活率及標(biāo)記率的檢測
        3.3.3 MTT檢測標(biāo)記后細(xì)胞增殖活力
        3.3.4 Annexin/碘化吡啶（PI）雙染色法檢測細(xì)胞凋亡
        3.3.5 標(biāo)記細(xì)胞流式細(xì)胞檢測細(xì)胞表面CD分子
        3.3.6 標(biāo)記細(xì)胞成脂成骨分化
        3.3.7 體外磁標(biāo)細(xì)胞核磁共振影像
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 SPIO標(biāo)記人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        3.4.2 不同濃度SPIO標(biāo)記脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞
        3.4.3 SPIO標(biāo)記細(xì)胞MTT
        3.4.4 SPIO標(biāo)記細(xì)胞凋亡檢測
        3.4.5 MIR檢測標(biāo)記情況
        3.4.6 流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表面CD分子表達(dá)
        3.4.7 標(biāo)記后成脂成骨分化潛能
    3.5 討論
    3.6 小結(jié)
4 Caveolin-1在脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向肝臟誘導(dǎo)分化過程中的表達(dá)
    4.1 前言
    4.2 材料與儀器
        4.2.1 細(xì)胞
        4.2.2 主要儀器
        4.2.3 主要試劑
    4.3 方法
        4.3.1 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇
        4.3.2 人脂肪干細(xì)胞向肝細(xì)胞的誘導(dǎo)
        4.3.3 免疫熒光法檢測Cav-1、ER-α36蛋白的表達(dá)與定位
        4.3.4 免疫印跡雜交檢測不同誘導(dǎo)時(shí)期細(xì)胞相關(guān)蛋白的表達(dá)
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 不同誘導(dǎo)時(shí)期肝樣細(xì)胞中Cav-1與ER-α36蛋白的表達(dá)
        4.4.2 不同誘導(dǎo)時(shí)期肝樣細(xì)胞p-MAPK、MAPK蛋白的表達(dá)
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄A 中英文對(duì)照及縮略語
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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