目的：利用混合多克隆細胞亞群裸鼠體內(nèi)實驗和基因組PCR的方法進行篩選和驗證具有肺轉(zhuǎn)移能力的細胞亞群、相關(guān)候選基因以及遺傳通路,為進一步研究惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的分子機理打下基礎(chǔ),為胰腺癌的臨床診斷、治療以及預防提供新的策略和靶點。方法：分別培養(yǎng)實驗室前期得到的45個胰腺癌肺轉(zhuǎn)移細胞克隆,待細胞生長至對數(shù)生長期時,取1×105個細胞/克隆,將45個細胞克隆混合為多克隆細胞亞群�；旌霞毎麛U增培養(yǎng)后,在第一輪的動物篩選試驗中,通過尾靜脈的注射方式接種混合的多克隆細胞亞群到裸鼠體內(nèi),1×106個細胞/只,裸鼠分為通過飲水給予強力霉素（Doxycycline, Dox）實驗組和普通飲水對照組,每組8只。待裸鼠出現(xiàn)瀕死體征時,取其肺組織（含轉(zhuǎn)移灶）原代培養(yǎng)肺轉(zhuǎn)移細胞亞群,提取其基因組DNA進行PCR分析,比較兩組裸鼠特異基因檢出率在第二輪的動物篩選試驗中,分別通過尾靜脈和腹腔注射2種方式接種裸鼠,1×106個細胞/只,每種接種方式又分為給予強力霉素實驗組和普通飲水對照組,每組8只,余操作（原代培養(yǎng)、基因組PCR）同第一輪動物篩選實驗。結(jié)果：本實驗通過兩輪動物體內(nèi)篩選具有高轉(zhuǎn)移特性的胰腺癌細胞株,經(jīng)原代培養(yǎng)... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
實驗材料
    1. 細胞株
    2. 實驗動物
    3. 主要耗材
    4. 主要試劑
    5. 引物
    6. 主要儀器設(shè)備
    7. 主要溶液及配制
實驗方法
    1. 細胞培養(yǎng)
    2. 動物接種
    3. 原代培養(yǎng)
    4. 高轉(zhuǎn)移細胞株基因組DNA的提取
    5. 基因組PCR
    6. 細胞總RNA的提取
    7. 實時熒光定量PCR驗證強力霉素對SQSTM1的調(diào)控作用
    8. Western Blot驗證強力霉素對SQSTM1的調(diào)控作用
    9. 細胞劃痕實驗檢測M7的遷移能力
    10. 細胞增殖實驗檢測M7細胞株的生長特性
實驗結(jié)果
    1. 多克隆混合細胞亞群體內(nèi)移植后動物存活情況
    2. 多克隆混合細胞亞群體內(nèi)移植后肺轉(zhuǎn)移情況
    3. 原代培養(yǎng)所得胰腺癌高轉(zhuǎn)移細胞株
    4. 提取的基因組DNA質(zhì)量檢測結(jié)果
    5. 基因組PCR篩選胰腺癌肺轉(zhuǎn)移關(guān)鍵基因
    6. 驗證強力霉素對SQSTM1的調(diào)控作用
    7. 細胞劃痕實驗
    8. 細胞增殖實驗
討論
總結(jié)
參考文獻
綜述
    參考文獻
實驗流程圖
縮略語表
個人簡歷
致謝



本文編號：2916751