目的：利用混合多克隆細(xì)胞亞群裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和基因組PCR的方法進(jìn)行篩選和驗(yàn)證具有肺轉(zhuǎn)移能力的細(xì)胞亞群、相關(guān)候選基因以及遺傳通路,為進(jìn)一步研究惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的分子機(jī)理打下基礎(chǔ),為胰腺癌的臨床診斷、治療以及預(yù)防提供新的策略和靶點(diǎn)。方法：分別培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室前期得到的45個(gè)胰腺癌肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞克隆,待細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí),取1×105個(gè)細(xì)胞/克隆,將45個(gè)細(xì)胞克隆混合為多克隆細(xì)胞亞群�；旌霞�(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)后,在第一輪的動(dòng)物篩選試驗(yàn)中,通過(guò)尾靜脈的注射方式接種混合的多克隆細(xì)胞亞群到裸鼠體內(nèi),1×106個(gè)細(xì)胞/只,裸鼠分為通過(guò)飲水給予強(qiáng)力霉素（Doxycycline, Dox）實(shí)驗(yàn)組和普通飲水對(duì)照組,每組8只。待裸鼠出現(xiàn)瀕死體征時(shí),取其肺組織（含轉(zhuǎn)移灶）原代培養(yǎng)肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞亞群,提取其基因組DNA進(jìn)行PCR分析,比較兩組裸鼠特異基因檢出率在第二輪的動(dòng)物篩選試驗(yàn)中,分別通過(guò)尾靜脈和腹腔注射2種方式接種裸鼠,1×106個(gè)細(xì)胞/只,每種接種方式又分為給予強(qiáng)力霉素實(shí)驗(yàn)組和普通飲水對(duì)照組,每組8只,余操作（原代培養(yǎng)、基因組PCR）同第一輪動(dòng)物篩選實(shí)驗(yàn)。結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)兩輪動(dòng)物體內(nèi)篩選具有高轉(zhuǎn)移特性的胰腺癌細(xì)胞株,經(jīng)原代培養(yǎng)... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
實(shí)驗(yàn)材料
    1. 細(xì)胞株
    2. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    3. 主要耗材
    4. 主要試劑
    5. 引物
    6. 主要儀器設(shè)備
    7. 主要溶液及配制
實(shí)驗(yàn)方法
    1. 細(xì)胞培養(yǎng)
    2. 動(dòng)物接種
    3. 原代培養(yǎng)
    4. 高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株基因組DNA的提取
    5. 基因組PCR
    6. 細(xì)胞總RNA的提取
    7. 實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證強(qiáng)力霉素對(duì)SQSTM1的調(diào)控作用
    8. Western Blot驗(yàn)證強(qiáng)力霉素對(duì)SQSTM1的調(diào)控作用
    9. 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)M7的遷移能力
    10. 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)M7細(xì)胞株的生長(zhǎng)特性
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1. 多克隆混合細(xì)胞亞群體內(nèi)移植后動(dòng)物存活情況
    2. 多克隆混合細(xì)胞亞群體內(nèi)移植后肺轉(zhuǎn)移情況
    3. 原代培養(yǎng)所得胰腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株
    4. 提取的基因組DNA質(zhì)量檢測(cè)結(jié)果
    5. 基因組PCR篩選胰腺癌肺轉(zhuǎn)移關(guān)鍵基因
    6. 驗(yàn)證強(qiáng)力霉素對(duì)SQSTM1的調(diào)控作用
    7. 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
    8. 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
討論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
實(shí)驗(yàn)流程圖
縮略語(yǔ)表
個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝



本文編號(hào)：2916751