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miR-101調(diào)控mTOR信號通路介導(dǎo)自噬參與肝臟缺血/再灌注損傷的機制研究

發(fā)布時間:2020-12-05 10:55
  目的:肝臟缺血/再灌注損傷(LIRI)是肝臟移植以及肝臟外科手術(shù)中常見的并發(fā)癥,對肝臟外科手術(shù)的效果以及術(shù)后患者肝功能的恢復(fù)有著巨大的影響。多少年來,如何減少肝臟損傷,盡最大可能做到對肝臟的保護并且提高患者預(yù)后,一直是肝臟手術(shù)中研究的熱點以及難點。近年來,對于LIRI具體機制的相關(guān)研究不斷增多,然而尚未完全闡明。本研究通過探索小鼠LIRI中miR-101的表達情況以及細胞自噬活性的變化來探討miR-101介導(dǎo)自噬在小鼠LIRI中的作用,進而揭示miR-101在LIRI中自噬調(diào)節(jié)的潛在功能和機制,以期為LIRI的臨床治療和研究提供一種新的思路。方法:建立小鼠肝臟節(jié)段性(70%肝葉夾閉)缺血以及再灌注損傷模型,血生化指標(biāo)檢測小鼠血清中轉(zhuǎn)氨酶(ALT、AST)含量的變化,HE染色觀察小鼠肝臟組織病理學(xué)損傷變化,TUNEL試劑盒檢測小鼠肝臟細胞凋亡情況,免疫組化觀察小鼠肝臟細胞增殖與凋亡情況,qRT-PCR檢測各組miR-101、AMPK mRNA、mTOR mRNA 的變化情況,Western Blot 檢測各組 AMPK、mTOR、p-mTOR、P62、Caspase-3 與 LC3 的表... 

【文章來源】:天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】:90 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

miR-101調(diào)控mTOR信號通路介導(dǎo)自噬參與肝臟缺血/再灌注損傷的機制研究


圖1.1各組小鼠血清AST/ALT水平??

再灌注,時損,肝細胞,肝損傷


時間的加長逐漸加重,與Sham組相比,在再灌注12?h時損傷最為嚴重(尸<0.001?),??再灌注24?h時損傷有所緩解。通過Suzuki病理學(xué)評分量化了缺血/再灌注誘導(dǎo)的??肝損傷情況,結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<〇.〇〇l,見圖1.2)。證明小鼠肝臟發(fā)生??缺血/再灌注后損傷情況隨著再灌注時間的延長而不斷加重,在再灌注12?h時病??理損傷最為嚴重,再灌注24?h由于肝臟部分細胞增殖,損傷又有所減輕。??Sham?IR=2h?IR=6h?IR=12h?IR=24h??〇?10.1??l??0^?>.?***??^3?6-?丁?***??fLiili??W?Sham?IR=2h?IR=6h?IR=12h?IR=24h??與?Sham?組相比:0.05,**P<?0.01,***P<?0.001??圖1.2各組小鼠肝臟病理學(xué)改變以及Suzuki病理學(xué)評分(HE,x200)??1.2.?3免疫組織化學(xué)檢測各組PCNA以及Caspase-3表達結(jié)果??免疫組化檢測LIRI后肝細胞的增殖和凋亡情況發(fā)現(xiàn),與Sham組相比再灌??注各組增殖標(biāo)志物PCNA的核內(nèi)表達明顯下降,在再灌注12?h表達降低最明顯??(尸<?0.001),再灌注24h表達有所回升(P<?0.01)。與Sham組相比,凋亡標(biāo)志??物Caspase-3的胞質(zhì)表達在再灌注各組肝細胞中逐漸增加

免疫組化檢測,再灌注,凋亡,凋亡細胞


核染為藍色,結(jié)果示,與Sham組相比再灌注各組凋亡細胞數(shù)量隨著再灌注時間??的延長逐漸增加,其中再灌注12h時凋亡最為嚴重(尸<0.001),再灌注24h凋??亡有所減輕(尸<0.05,見圖1.4)。通過TUNEL的檢測更進一步證實了隨著再灌??注時間的延長凋亡逐漸增加。??19??

【參考文獻】:
期刊論文
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本文編號:2899341

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