發(fā)布時間：2020-12-05 10:55

　　目的:肝臟缺血/再灌注損傷（LIRI）是肝臟移植以及肝臟外科手術(shù)中常見的并發(fā)癥,對肝臟外科手術(shù)的效果以及術(shù)后患者肝功能的恢復(fù)有著巨大的影響。多少年來,如何減少肝臟損傷,盡最大可能做到對肝臟的保護并且提高患者預(yù)后,一直是肝臟手術(shù)中研究的熱點以及難點。近年來,對于LIRI具體機制的相關(guān)研究不斷增多,然而尚未完全闡明。本研究通過探索小鼠LIRI中miR-101的表達情況以及細胞自噬活性的變化來探討miR-101介導(dǎo)自噬在小鼠LIRI中的作用,進而揭示miR-101在LIRI中自噬調(diào)節(jié)的潛在功能和機制,以期為LIRI的臨床治療和研究提供一種新的思路。方法:建立小鼠肝臟節(jié)段性（70%肝葉夾閉）缺血以及再灌注損傷模型,血生化指標(biāo)檢測小鼠血清中轉(zhuǎn)氨酶（ALT、AST）含量的變化,HE染色觀察小鼠肝臟組織病理學(xué)損傷變化,TUNEL試劑盒檢測小鼠肝臟細胞凋亡情況,免疫組化觀察小鼠肝臟細胞增殖與凋亡情況,qRT-PCR檢測各組miR-101、AMPK mRNA、mTOR mRNA 的變化情況,Western Blot 檢測各組 AMPK、mTOR、p-mTOR、P62、Caspase-3 與 LC3 的表... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１各組小鼠血清ＡＳＴ／ＡＬＴ水平??

時間的加長逐漸加重，與Ｓｈａｍ組相比，在再灌注１２?ｈ時損傷最為嚴重（尸＜０．００１?），??再灌注２４?ｈ時損傷有所緩解。通過Ｓｕｚｕｋｉ病理學(xué)評分量化了缺血／再灌注誘導(dǎo)的??肝損傷情況，結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Ｐ＜〇．〇〇ｌ，見圖１．２）。證明小鼠肝臟發(fā)生??缺血／再灌注后損傷情況隨著再灌注時間的延長而不斷加重，在再灌注１２?ｈ時病??理損傷最為嚴重，再灌注２４?ｈ由于肝臟部分細胞增殖，損傷又有所減輕。??Ｓｈａｍ?ＩＲ＝２ｈ?ＩＲ＝６ｈ?ＩＲ＝１２ｈ?ＩＲ＝２４ｈ??〇?１０．１??ｌ??０＾?＞．?＊＊＊??＾３?６－?丁?＊＊＊??ｆＬｉｉｌｉ??Ｗ?Ｓｈａｍ?ＩＲ＝２ｈ?ＩＲ＝６ｈ?ＩＲ＝１２ｈ?ＩＲ＝２４ｈ??與?Ｓｈａｍ?組相比：０．０５，＊＊Ｐ＜?０．０１，＊＊＊Ｐ＜?０．００１??圖１．２各組小鼠肝臟病理學(xué)改變以及Ｓｕｚｕｋｉ病理學(xué)評分（ＨＥ，ｘ２００）??１．２．?３免疫組織化學(xué)檢測各組ＰＣＮＡ以及Ｃａｓｐａｓｅ－３表達結(jié)果??免疫組化檢測ＬＩＲＩ后肝細胞的增殖和凋亡情況發(fā)現(xiàn)，與Ｓｈａｍ組相比再灌??注各組增殖標(biāo)志物ＰＣＮＡ的核內(nèi)表達明顯下降，在再灌注１２?ｈ表達降低最明顯??（尸＜?０．００１），再灌注２４ｈ表達有所回升（Ｐ＜?０．０１）。與Ｓｈａｍ組相比，凋亡標(biāo)志??物Ｃａｓｐａｓｅ－３的胞質(zhì)表達在再灌注各組肝細胞中逐漸增加

核染為藍色，結(jié)果示，與Ｓｈａｍ組相比再灌注各組凋亡細胞數(shù)量隨著再灌注時間??的延長逐漸增加，其中再灌注１２ｈ時凋亡最為嚴重（尸＜０．００１），再灌注２４ｈ凋??亡有所減輕（尸＜０．０５，見圖１．４）。通過ＴＵＮＥＬ的檢測更進一步證實了隨著再灌??注時間的延長凋亡逐漸增加。??１９??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]AMPK通過調(diào)控mTOR/Nix信號通路參與小鼠肝缺血-再灌注損傷[J]. 杜晨陽,王振,宋虎,李世朋,張海明,張建軍.  中國普外基礎(chǔ)與臨床雜志. 2017(10)
[2]Liver transplantation: Current status and challenges[J]. Caroline C Jadlowiec,Timucin Taner.  World Journal of Gastroenterology. 2016(18)
[3]mi R-30b inhibits autophagy to alleviate hepatic ischemiareperfusion injury via decreasing the Atg12-Atg5 conjugate[J]. Shi-Peng Li,Jin-Dan He,Zhen Wang,Yao Yu,Shu-Yu Fu,Hai-Ming Zhang,Jian-Jun Zhang,Zhong-Yang Shen.  World Journal of Gastroenterology. 2016(18)
[4]Heat shock pretreatment improves stem cell repair following ischemia-reperfusion injury via autophagy[J]. Peng-Fei Qiao,Lei Yao,Xin-Chen Zhang,Guo-Dong Li,De-Quan Wu.  World Journal of Gastroenterology. 2015(45)
[5]Mechanisms of hepatic ischemia-reperfusion injury and protective effects of nitric oxide[J]. Lian-Yue Guan,Pei-Yao Fu,Pei-Dong Li,Zhuo-Nan Li,Hong-Yu Liu,Min-Gang Xin,Wei Li.  World Journal of Gastrointestinal Surgery. 2014(07)



本文編號：2899341