目的：腸易激綜合征(Irritable Bowel Syndrome,IBS)是以慢性內(nèi)臟痛和胃腸功能紊亂為主要特征的功能性疾病，但其內(nèi)臟痛發(fā)生的具體機制還不清楚。越來越多的數(shù)據(jù)資料表明孕期的應激事件可能會對子代產(chǎn)生長期的影響，從而導致胚胎源性疾病。本研究探討孕期應激(Prenatal Maternal Stress, PMS)是否能導致子代成年雄性大鼠結腸痛覺過敏及其潛在的分子神經(jīng)機制。 方法：1.把懷孕的雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠分成實驗(PMS)組和對照(CON)組。PMS大鼠從懷孕第6天開始每天經(jīng)歷異源型間隙性應激(Heterotypical IntermittentStress, HIS)，直至第22天。2.子代出生后，挑選雄性個體，待其6周后進行結直腸擴張(Colorectal Distention, CRD)行為學實驗。運用熒光素(DiI)逆行標記結腸相關脊髓背根神經(jīng)節(jié)(Dorsal Root Ganglion, DRG),全細胞膜片鉗方法研究大鼠結腸相關DRG興奮性的變化。3.腹腔注射胱硫醚-β-合成酶(Cystathionine β-synthase, CBS)拮抗劑AOAA，運用western blotting方法觀察子代雄性大鼠DRG T13-L2中CBS和辣椒素受體(Transient Receptor Potential Vanilloid1, TRPV1)蛋白表達變化，用分光光度計法分析子代雄性大鼠血漿中硫化氫(Hydren Sulfide, H2S)濃度的變化。 結果：1.孕期應激誘發(fā)6-10周子代雄性大鼠CRD內(nèi)臟收縮反應增加，表現(xiàn)為EMG振幅增加。6周子代雄性大鼠的靜息膜電位去極化增加，基強度減小，動作電位個數(shù)增加，說明結腸相關DRG興奮性增加。2.PMS組子代雄性大鼠腹腔注射AOAA后，翻轉(zhuǎn)大鼠內(nèi)臟高敏，并呈劑量效應關系。連續(xù)7天腹腔注射AOAA10mg/kg能顯著降低PMS組子代大鼠的興奮性。3.孕期應激誘發(fā)6、8、10周子代大鼠結腸相關DRG中CBS蛋白表達水平顯著升高，6周齡時子代雄性大鼠血漿H2S濃度增加；TRPV1表達升高，而連續(xù)7天腹腔注射AOAA10mg/kg后，TRPV1表達下降。 結論：孕期異源型間隙性應激誘發(fā)子代雄性大鼠成年后內(nèi)臟痛覺高敏，CBS和TRPV1在大鼠結腸相關DRG中表達升高，CBS-H2S信號通路可能通過作用于TRPV1受體表達參與內(nèi)臟痛高敏的發(fā)生。
【學位單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2013
【中圖分類】：R574
【部分圖文】：

處理gin Pro8 及 Matlab 統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)處理。實驗數(shù)示，數(shù)據(jù)首先進行的正態(tài)分布分析，在適當?shù)那闆r下采用檢驗或 Mann-Whitney 秩和檢驗。圖表制作采用 excel201異具有統(tǒng)計學意義。結 果性大鼠體重及孕鼠孕期的變化 CON 組相比較，子代雄性大鼠出生后各個時間點體重.05，Mann-Whitney 秩和檢驗)。孕鼠的孕期相比較無明顯.13 days, n=8; PMS: 23 0.33 days, n=8, P 0.05，Mann-Whitn

2．PMS 增強子代雄性大鼠結腸 CRD 內(nèi)臟收縮反應。用 EMG 方法記錄各個時間點大鼠結腸對 CRD 收縮反應。PMS 組與 CON 組子代雄性大鼠相比，在大鼠 6 周齡時，40，60，80mmHg 壓力下，EMG 振幅增加，結腸對 CRD 反應增加，說明 PMS 組內(nèi)臟痛覺高敏(圖 1A,n=9,*P<0.05，雙因素重復方差分析)；在 8 周齡時，20 至 80mmHg 壓力下，PMS 組 EMG 振幅增加(圖 1B，n=9,*p<0.05，雙因素重復方差分析)。在 10 周齡時，只在 60，80mmHg 壓力下，PMS 組EMG 振幅增加(圖 1C，n=9, *p<0.05，F(xiàn)riedman 方差分析和 Mann-Whitney 秩和檢驗)；在12周齡時,在各個壓力兩組子代大鼠結腸對CRD反應沒有差異(圖1B,n=9, P 0.05)。說明在 6-10 周齡時，PMS 組子代大鼠內(nèi)臟高敏。

生一個動作電流,即基強度減小，(圖3B，n=21,CON：0.19 0.01 nA PMS：0.10 0.0<0.05,雙樣本 t 檢驗)，對固定的電流刺激爆發(fā)更多的動作電位(圖 3B，n=21, *P<樣本 t 檢驗或 Mann-Whitney 秩和檢驗)。小 結從以上數(shù)據(jù)可以得出，孕期時受到不良事件的應激后，子代雄性大鼠結腸發(fā)高敏。孕期應激對子代雄性個體體重雖然沒有產(chǎn)生顯著差異，但是 PMS 組與 C相比，子代體重下降 10%。目前在這個動物模型中，我們無法說明孕期應激是響子代體積大小、孕期等來影響內(nèi)臟痛覺的。另外，我們選擇子代雄性個體，了雌激素在內(nèi)臟痛方面的影響。從電生理角度我們可以看出，孕期應激使 PMS 組子代雄性大鼠結腸相關 D奮性增強,從而進一步說明孕期應激能誘發(fā)子代雄性大鼠內(nèi)臟痛覺高敏。
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本文編號：2889077