肝臟是機(jī)體最大的消化器官，承擔(dān)著分泌膽汁、合成涉及生命活動(dòng)中重要蛋白質(zhì)和解毒功能。與其它器官不同，肝臟具有肝動(dòng)脈和門靜脈兩套血液供應(yīng)途徑，鑒于這種特殊的解剖學(xué)位置和功能，肝臟一直暴露于大量的腸道來(lái)源的抗原物質(zhì)，包括病原菌、毒素、腫瘤細(xì)胞和細(xì)菌代謝產(chǎn)物以及無(wú)害的食物抗原，這樣就決定了肝臟不僅承擔(dān)著“內(nèi)部血液過(guò)濾”的作用，同時(shí)還“肩負(fù)”清除腸道來(lái)源的外來(lái)物質(zhì)的重任。所以人們推測(cè)肝臟必須擁有一套快速選擇性的反應(yīng)機(jī)制去應(yīng)對(duì)這些肝臟特異性潛在“危險(xiǎn)信號(hào)”。固有免疫反應(yīng)作為入侵病原菌的一線防御機(jī)制，以及局部免疫反應(yīng)機(jī)制在應(yīng)對(duì)各種各樣的免疫挑戰(zhàn)中的作用備受青睞。已知肝臟是細(xì)胞因子、補(bǔ)體和急性期反應(yīng)蛋白這類可溶性分子的合成部位，而且還有大量的吞噬細(xì)胞、抗原提呈細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞。根據(jù)肝臟高比例的固有免疫細(xì)胞(主要指Kupffer細(xì)胞、NKT細(xì)胞和NK細(xì)胞)和它們對(duì)肝臟外源刺激的快速反應(yīng)能力，肝臟被定義為具有固有免疫特性的器官已經(jīng)被多家研究結(jié)果所支持，因此，通過(guò)結(jié)合“肝臟學(xué)”和“免疫學(xué)”，一門新型學(xué)科“肝臟免疫學(xué)”應(yīng)運(yùn)而生。大量資料研究顯示肝臟積聚的這些固有免疫細(xì)胞在肝臟的免疫監(jiān)視功能中發(fā)揮重要作用，譬如抗病毒、抗寄生蟲和抗細(xì)菌感染。然而過(guò)度的免疫細(xì)胞活化有時(shí)可能對(duì)肝細(xì)胞進(jìn)行意想不到的自身攻擊，引起自身免疫性的肝臟損傷。本研究旨在探索固有免疫反應(yīng)在肝臟免疫損傷和肝臟再生中的作用，主要試圖回答以下三個(gè)科學(xué)問(wèn)題：建立新型NK細(xì)胞介導(dǎo)的小鼠肝炎模型，推動(dòng)NK細(xì)胞在自身免疫性肝病中作用機(jī)制的深入研究；深入了解NK細(xì)胞在ConA誘導(dǎo)的肝臟損傷的作用；肝臟固有免疫細(xì)胞對(duì)肝臟再生的調(diào)節(jié)機(jī)制，特別是探討HBV感染是如何通過(guò)固有免疫反應(yīng)途徑來(lái)負(fù)調(diào)節(jié)小鼠肝臟再生。本研究獲得的主要結(jié)果大致分為以下四個(gè)部分： 新型NK細(xì)胞介導(dǎo)、TLR3激動(dòng)劑誘導(dǎo)的肝炎模型的建立：目前，T細(xì)胞、NKT細(xì)胞和巨噬細(xì)胞在自身免疫性肝炎中的作用研究甚多，相應(yīng)的動(dòng)物模型均有報(bào)道。然而，NK細(xì)胞在肝臟損傷中的作用似乎顯得很神秘。本部分研究目的就是建立一種NK細(xì)胞介導(dǎo)的肝炎小鼠動(dòng)物模型，來(lái)促進(jìn)NK細(xì)胞在自身免疫性肝炎的機(jī)制研究。我們采用了TLR3配體聚肌胞(poly(I:C))活化NK細(xì)胞，觀察后續(xù)的肝臟損傷。B6小鼠腹腔注射poly(I:C)20微克／克體重，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)分析肝臟NK細(xì)胞比例和絕對(duì)數(shù)，血清轉(zhuǎn)氨酶和HE染色被用作評(píng)價(jià)肝臟損傷的指標(biāo)。發(fā)現(xiàn)poly(I:C)注射后，肝臟NK細(xì)胞顯著
【學(xué)位單位】：中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2006
【中圖分類】：R575
【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
英文摘要(ABSTRACT)
第一章 文獻(xiàn)綜述
    第一節(jié) 固然免疫細(xì)胞在肝臟損傷中的作用
        1、NKT細(xì)胞
        2、NK細(xì)胞
    第二節(jié) 固有免疫細(xì)胞在肝臟再生中的調(diào)節(jié)機(jī)制
        1、肝臟再生過(guò)程中固有免疫細(xì)胞肝內(nèi)“重新入住”的機(jī)制
        2、固有免疫細(xì)胞負(fù)調(diào)節(jié)肝臟再生
        3、NK細(xì)胞
        4、NKT細(xì)胞
        5、Kupffer細(xì)胞
第二章 前言
第三章 材料和方法
    第一節(jié) 肝臟淋巴細(xì)胞的分離和固有免疫特性
    第二節(jié) 新型NK細(xì)胞介導(dǎo)的肝炎模型的建立
    第三節(jié) 再探NK細(xì)胞在CONA誘導(dǎo)的肝炎模型中的作用
    第四節(jié) 選擇性去除肝臟NKT細(xì)胞促進(jìn)了小鼠肝臟再生
    第五節(jié) NKT細(xì)胞負(fù)調(diào)節(jié)HBV轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟再生:一種新的HBV致病機(jī)制
第四章 結(jié)果和討論
    第一節(jié) 肝臟淋巴細(xì)胞的分離和固有免疫特性
        1、放血對(duì)肝臟淋巴細(xì)胞分離的影響
        2、酶消化對(duì)肝臟淋巴細(xì)胞表面標(biāo)記的影響
        3、兩種方法在細(xì)胞得率上沒(méi)有差異
        4、機(jī)械研磨法分離的肝臟淋巴細(xì)胞適合功能分析
        5、肝臟具有固有免疫器官特點(diǎn)
    第二節(jié) 新型NK細(xì)胞介導(dǎo)的肝炎模型的建立
        1、poly(I:C)偏向性地誘導(dǎo)NK細(xì)胞向肝內(nèi)聚集
        2、poly(I:C)注射引起NK細(xì)胞活化
        3、poly(I:C)誘導(dǎo)血清ALT和AST上升和肝內(nèi)炎癥反應(yīng)
        4、NK細(xì)胞是poly(I:C)誘導(dǎo)的效應(yīng)細(xì)胞
        5、NK細(xì)胞介導(dǎo)poly(I:C)誘導(dǎo)的肝臟損傷的分子機(jī)制
        6、Kupffer細(xì)胞分泌IL-12導(dǎo)致NK細(xì)胞肝內(nèi)聚集和后續(xù)的肝臟損傷
        7、VCAM-1在poly(I:C)誘導(dǎo)的NK細(xì)胞聚集和肝臟損傷發(fā)揮重要作用
    第三節(jié) 再探NK細(xì)胞在CONA誘導(dǎo)的肝炎模型中的作用
        1、ConA誘導(dǎo)的肝臟損傷中不依賴NK細(xì)胞
        2、ConA誘導(dǎo)的肝臟損傷模型中NK細(xì)胞毒活性削弱
        3、高濃度IFN-γ刺激的NK細(xì)胞識(shí)別功能缺陷
        4、高濃度IFN-γ刺激對(duì)NK細(xì)胞效應(yīng)分子的影響
    第四節(jié) 選擇性去除肝臟NKT細(xì)胞促進(jìn)了小鼠肝臟再生
        1、非肝臟毒性ConA劑量的選擇
        2、非肝臟毒性劑量ConA預(yù)處理刺激小鼠肝臟再生
        3、ConA預(yù)處理引起肝臟NKT細(xì)胞減少
        4、ConA預(yù)處理導(dǎo)致NKT細(xì)胞經(jīng)歷活化誘導(dǎo)的凋亡
    第五節(jié) NKT細(xì)胞負(fù)調(diào)節(jié)HBV轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟再生:一種新的HBV致病機(jī)制
        1、在部分肝切除動(dòng)物模型中HBV-tg小鼠肝臟再生延遲
        2、在肝臟再生的早期HBV-tg小鼠NKT細(xì)胞數(shù)目和活化狀態(tài)顯著增強(qiáng)
        3、清除NKT細(xì)胞改善了HBV-tg小鼠肝臟再生下降
        4、HBV-tg小鼠對(duì)過(guò)繼轉(zhuǎn)移的再生肝臟NKT細(xì)胞敏感
        5、HBV-tg小鼠肝細(xì)胞表面上升CD1d分子導(dǎo)致NKT細(xì)胞活化和肝臟再生下降
        6、HBV-tg小鼠NKT細(xì)胞在肝臟切除后分泌IFN-γ增加
        7、阻斷CD1d或者中和IL-12抑制了NKT細(xì)胞活化
        8、IFN-γ中和促進(jìn)了HBV-tg小鼠肝臟再生
        9、外源性注射重組小鼠IFN-γ加重了HBV-tg小鼠肝臟再生缺陷
        10、IFN-γ抑制肝臟再生是通過(guò)負(fù)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期,而不是誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡
        11、HBV-tg小鼠對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的損傷敏感,并且損傷后肝臟再生下降
    第六節(jié) 研究展望
致謝
附錄
    一、攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表和擬發(fā)表的論文
    二、攻讀博士學(xué)位期間所獲得的獎(jiǎng)勵(lì)
    三、攻讀博士學(xué)位期間所獲得的國(guó)家發(fā)明專利
    四、攻讀博士學(xué)位期間參加的國(guó)際學(xué)術(shù)會(huì)議
附: 發(fā)表論文內(nèi)容
附: 發(fā)明專利申請(qǐng)公開說(shuō)明書

【共引文獻(xiàn)】

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4 張玲,廖曉輝,劉杞,宋曉英;肝再生增強(qiáng)因子在急性腎衰大鼠模型腎組織中的表達(dá)及意義[J];重慶醫(yī)學(xué);2003年06期

5 孔祥平;易學(xué)瑞;;肝再生增強(qiáng)因子研究進(jìn)展[J];傳染病信息;2008年02期

6 吳貽琛;辛紹杰;;肝再生增強(qiáng)因子研究進(jìn)展[J];傳染病信息;2012年01期

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4 唐琳;肝再生增強(qiáng)因子與肝癌發(fā)生、發(fā)展關(guān)系的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

5 彭勇;核因子-κB圈套協(xié)同CTLA4-Ig抗大鼠肝移植急性排斥反應(yīng)的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

6 李力;人胎肝來(lái)源PACT等重要功能基因的基因打靶研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

7 林瑩;肝再生增強(qiáng)因子調(diào)控細(xì)胞增殖及其與鈉、鉀ATP酶關(guān)系研究[D];華南理工大學(xué);2006年

8 張金彥;減體肝移植后受體來(lái)源骨髓干細(xì)胞跨分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2006年

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6 張林;1.利用噬菌體表面展示技術(shù)構(gòu)建人肝癌細(xì)胞的cDNA表達(dá)文庫(kù) 　2.從人肝癌細(xì)胞cDNA表達(dá)文庫(kù)中篩選hALR相互作用蛋白[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

7 謝華;rALR對(duì)大鼠單個(gè)核細(xì)胞作用的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

8 廖曉輝;ALR對(duì)大鼠急性腎衰竭中腎小管上皮細(xì)胞的生物活性作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

9 郭書權(quán);睪丸組織及精液中肝再生增強(qiáng)因子的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

10 劉海忠;阻斷ICOS共刺激通路抗肝移植急性排斥的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2005年

本文編號(hào)：2838619