肝臟是機體最大的消化器官，承擔著分泌膽汁、合成涉及生命活動中重要蛋白質和解毒功能。與其它器官不同，肝臟具有肝動脈和門靜脈兩套血液供應途徑，鑒于這種特殊的解剖學位置和功能，肝臟一直暴露于大量的腸道來源的抗原物質，包括病原菌、毒素、腫瘤細胞和細菌代謝產(chǎn)物以及無害的食物抗原，這樣就決定了肝臟不僅承擔著“內(nèi)部血液過濾”的作用，同時還“肩負”清除腸道來源的外來物質的重任。所以人們推測肝臟必須擁有一套快速選擇性的反應機制去應對這些肝臟特異性潛在“危險信號”。固有免疫反應作為入侵病原菌的一線防御機制，以及局部免疫反應機制在應對各種各樣的免疫挑戰(zhàn)中的作用備受青睞。已知肝臟是細胞因子、補體和急性期反應蛋白這類可溶性分子的合成部位，而且還有大量的吞噬細胞、抗原提呈細胞以及淋巴細胞。根據(jù)肝臟高比例的固有免疫細胞(主要指Kupffer細胞、NKT細胞和NK細胞)和它們對肝臟外源刺激的快速反應能力，肝臟被定義為具有固有免疫特性的器官已經(jīng)被多家研究結果所支持，因此，通過結合“肝臟學”和“免疫學”，一門新型學科“肝臟免疫學”應運而生。大量資料研究顯示肝臟積聚的這些固有免疫細胞在肝臟的免疫監(jiān)視功能中發(fā)揮重要作用，譬如抗病毒、抗寄生蟲和抗細菌感染。然而過度的免疫細胞活化有時可能對肝細胞進行意想不到的自身攻擊，引起自身免疫性的肝臟損傷。本研究旨在探索固有免疫反應在肝臟免疫損傷和肝臟再生中的作用，主要試圖回答以下三個科學問題：建立新型NK細胞介導的小鼠肝炎模型，推動NK細胞在自身免疫性肝病中作用機制的深入研究；深入了解NK細胞在ConA誘導的肝臟損傷的作用；肝臟固有免疫細胞對肝臟再生的調節(jié)機制，特別是探討HBV感染是如何通過固有免疫反應途徑來負調節(jié)小鼠肝臟再生。本研究獲得的主要結果大致分為以下四個部分： 新型NK細胞介導、TLR3激動劑誘導的肝炎模型的建立：目前，T細胞、NKT細胞和巨噬細胞在自身免疫性肝炎中的作用研究甚多，相應的動物模型均有報道。然而，NK細胞在肝臟損傷中的作用似乎顯得很神秘。本部分研究目的就是建立一種NK細胞介導的肝炎小鼠動物模型，來促進NK細胞在自身免疫性肝炎的機制研究。我們采用了TLR3配體聚肌胞(poly(I:C))活化NK細胞，觀察后續(xù)的肝臟損傷。B6小鼠腹腔注射poly(I:C)20微克／克體重，通過流式細胞術分析肝臟NK細胞比例和絕對數(shù)，血清轉氨酶和HE染色被用作評價肝臟損傷的指標。發(fā)現(xiàn)poly(I:C)注射后，肝臟NK細胞顯著
【學位單位】：中國科學技術大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2006
【中圖分類】：R575
【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
英文摘要(ABSTRACT)
第一章 文獻綜述
    第一節(jié) 固然免疫細胞在肝臟損傷中的作用
        1、NKT細胞
        2、NK細胞
    第二節(jié) 固有免疫細胞在肝臟再生中的調節(jié)機制
        1、肝臟再生過程中固有免疫細胞肝內(nèi)“重新入住”的機制
        2、固有免疫細胞負調節(jié)肝臟再生
        3、NK細胞
        4、NKT細胞
        5、Kupffer細胞
第二章 前言
第三章 材料和方法
    第一節(jié) 肝臟淋巴細胞的分離和固有免疫特性
    第二節(jié) 新型NK細胞介導的肝炎模型的建立
    第三節(jié) 再探NK細胞在CONA誘導的肝炎模型中的作用
    第四節(jié) 選擇性去除肝臟NKT細胞促進了小鼠肝臟再生
    第五節(jié) NKT細胞負調節(jié)HBV轉基因小鼠肝臟再生:一種新的HBV致病機制
第四章 結果和討論
    第一節(jié) 肝臟淋巴細胞的分離和固有免疫特性
        1、放血對肝臟淋巴細胞分離的影響
        2、酶消化對肝臟淋巴細胞表面標記的影響
        3、兩種方法在細胞得率上沒有差異
        4、機械研磨法分離的肝臟淋巴細胞適合功能分析
        5、肝臟具有固有免疫器官特點
    第二節(jié) 新型NK細胞介導的肝炎模型的建立
        1、poly(I:C)偏向性地誘導NK細胞向肝內(nèi)聚集
        2、poly(I:C)注射引起NK細胞活化
        3、poly(I:C)誘導血清ALT和AST上升和肝內(nèi)炎癥反應
        4、NK細胞是poly(I:C)誘導的效應細胞
        5、NK細胞介導poly(I:C)誘導的肝臟損傷的分子機制
        6、Kupffer細胞分泌IL-12導致NK細胞肝內(nèi)聚集和后續(xù)的肝臟損傷
        7、VCAM-1在poly(I:C)誘導的NK細胞聚集和肝臟損傷發(fā)揮重要作用
    第三節(jié) 再探NK細胞在CONA誘導的肝炎模型中的作用
        1、ConA誘導的肝臟損傷中不依賴NK細胞
        2、ConA誘導的肝臟損傷模型中NK細胞毒活性削弱
        3、高濃度IFN-γ刺激的NK細胞識別功能缺陷
        4、高濃度IFN-γ刺激對NK細胞效應分子的影響
    第四節(jié) 選擇性去除肝臟NKT細胞促進了小鼠肝臟再生
        1、非肝臟毒性ConA劑量的選擇
        2、非肝臟毒性劑量ConA預處理刺激小鼠肝臟再生
        3、ConA預處理引起肝臟NKT細胞減少
        4、ConA預處理導致NKT細胞經(jīng)歷活化誘導的凋亡
    第五節(jié) NKT細胞負調節(jié)HBV轉基因小鼠肝臟再生:一種新的HBV致病機制
        1、在部分肝切除動物模型中HBV-tg小鼠肝臟再生延遲
        2、在肝臟再生的早期HBV-tg小鼠NKT細胞數(shù)目和活化狀態(tài)顯著增強
        3、清除NKT細胞改善了HBV-tg小鼠肝臟再生下降
        4、HBV-tg小鼠對過繼轉移的再生肝臟NKT細胞敏感
        5、HBV-tg小鼠肝細胞表面上升CD1d分子導致NKT細胞活化和肝臟再生下降
        6、HBV-tg小鼠NKT細胞在肝臟切除后分泌IFN-γ增加
        7、阻斷CD1d或者中和IL-12抑制了NKT細胞活化
        8、IFN-γ中和促進了HBV-tg小鼠肝臟再生
        9、外源性注射重組小鼠IFN-γ加重了HBV-tg小鼠肝臟再生缺陷
        10、IFN-γ抑制肝臟再生是通過負調節(jié)細胞周期,而不是誘導肝細胞凋亡
        11、HBV-tg小鼠對四氯化碳誘導的損傷敏感,并且損傷后肝臟再生下降
    第六節(jié) 研究展望
致謝
附錄
    一、攻讀博士學位期間發(fā)表和擬發(fā)表的論文
    二、攻讀博士學位期間所獲得的獎勵
    三、攻讀博士學位期間所獲得的國家發(fā)明專利
    四、攻讀博士學位期間參加的國際學術會議
附: 發(fā)表論文內(nèi)容
附: 發(fā)明專利申請公開說明書

【共引文獻】

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4 張玲,廖曉輝,劉杞,宋曉英;肝再生增強因子在急性腎衰大鼠模型腎組織中的表達及意義[J];重慶醫(yī)學;2003年06期

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7 申海菊 ,張陽德 ,劉曉冬 ,楊林 ,黃秋林 ,賈曉魏;人肝細胞再生增強因子克隆及序列分析[J];中國醫(yī)師雜志;2002年09期

8 李青,張麗梅,劉殿武,賀宇彤,肖永紅,何海艷;肝再生增強因子重組質粒對肝纖維化大鼠的實驗治療作用[J];第三軍醫(yī)大學學報;2005年08期

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本文編號：2838619