發(fā)布時(shí)間：2020-09-09 16:58

　　 近年來獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)已成為嚴(yán)重危害全人類健康的傳染病之一,人們對其研究也逐漸深入。在整個(gè)控制HIV/AIDS進(jìn)展的機(jī)體免疫過程中,細(xì)胞免疫始終占據(jù)主導(dǎo)的地位,其中病毒特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)應(yīng)答最為關(guān)鍵。在對CTL應(yīng)答反應(yīng)的研究中,較多地采用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)吸附實(shí)驗(yàn)( ELISPOT )檢測技術(shù),將CTL應(yīng)答的強(qiáng)度量化,這些研究都是利用單個(gè)細(xì)胞的單個(gè)斑點(diǎn)的形成來對干擾素-γ(IFN-γ)的分泌細(xì)胞進(jìn)行定量,并將此數(shù)量的多少直接等價(jià)于CTL應(yīng)答強(qiáng)度(頻數(shù))的高低。但是我們知道并非所有的CTL都分泌IFN-γ,而且除了CD8~+T細(xì)胞之外,CD4~+T細(xì)胞和非特異細(xì)胞(如NK細(xì)胞)也釋放IFN-γ,這些因素都會(huì)對斑點(diǎn)形成細(xì)胞(SFC)的數(shù)量產(chǎn)生影響,進(jìn)而影響到對CTL應(yīng)答強(qiáng)度(頻數(shù))的判斷。而且既往對HIV-1特異性CD4~+和CD8~+T細(xì)胞應(yīng)答在對抗HIV-1方面的研究采用的標(biāo)本多為人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC) ,盡管國外有少量直接針對HIV-1特異性CD4~+和CD8~+T細(xì)胞反應(yīng)的研究,但在中國人群中缺乏研究報(bào)道,因此展開這方面的研究是很有必要的。 本研究選取中國HIV-1單純感染者26例,HIV-1/HCV合并感染者23例為研究對象,采用免疫磁珠分選技術(shù),從研究對象的PBMC中分選出CD4~+T及CD8~+T細(xì)胞,然后采用ELISPOT,以HIV-1 P24編碼區(qū)的氨基酸序列人工合成的12個(gè)重疊肽段組成的肽段庫作為特異性抗原表位,對研究對象的CD4~+、CD8~+T細(xì)胞及PBMC的IFN-γ分泌細(xì)胞頻數(shù)進(jìn)行測定,分析比較CD4~+和CD8~+T淋巴細(xì)胞對特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答的影響。同時(shí)采用了酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測了研究對象血漿中IFN-γ、白細(xì)胞介素( IL )-4、IL-6、IL-7、IL-12、IL-21的濃度,分析這些細(xì)胞因子與HIV-1、HCV感染的關(guān)系。 主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下: 1.在對接受高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療(HAART)的26例單純HIV-1感染者和23例HIV-1/HCV合并感染者的HIV-1抗原特異性CD4~+T、CD8~+T細(xì)胞免疫應(yīng)答的研究中發(fā)現(xiàn),單純HIV-1感染者的HIV-1抗原特異性CD4~+T細(xì)胞應(yīng)答頻數(shù)顯著低于CD8~+T細(xì)胞( F=4.592 , P=0.037 )及PBMC ( F=5.436 , P=0.025 )的應(yīng)答頻數(shù),但是HIV-1抗原特異性CD8~+T細(xì)胞應(yīng)答頻數(shù)與PBMC相比,差異無顯著性( F=0.001 , P=0.970 )。HIV/HCV合并感染者的HIV-1抗原特異性CD4~+T細(xì)胞( Z= -2.432 , P=0.015 )、CD8~+T細(xì)胞( Z= -1.996 , P=0.046 )及PBMC ( Z= -2.306 , P=0.021 )的應(yīng)答頻數(shù)顯著低于單純HIV-1感染者。 2.對所有研究對象全血中CD4~+T細(xì)胞、CD8~+T細(xì)胞數(shù)與HIV-1特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答的相關(guān)性研究中發(fā)現(xiàn),單純HIV-1感染者和HIV/HCV合并感染者的HIV-1抗原特異性CD4~+T、CD8~+T細(xì)胞及PBMC應(yīng)答頻數(shù)與全血中CD4~+T細(xì)胞、CD8~+T細(xì)胞數(shù)均無相關(guān)性。 3.對單純HIV-1感染組及HIV-1/HCV合并感染組血漿中病毒載量進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn):單純感染組組內(nèi)病毒載量小于40拷貝/mL的病例的HIV-1抗原特異性CD4~+T、CD8~+T細(xì)胞及PBMC應(yīng)答頻數(shù)高于病毒載量大于40拷貝/mL的病例,但是差異無顯著性(P=0.166 , 0.187, 0.400 );在病毒載量小于40拷貝/mL時(shí),單純感染組的HIV-1抗原特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答頻數(shù)顯著高于合并感染組( P=0.006, P=0.026, P=0.021),而病毒載量大于40拷貝/mL時(shí),兩組組間差異無顯著性( P=0.268, P=0.376 , P=0.507 )。 4.對HIV-1單純感染組、HIV-1/ HCV合并感染組及正常對照組血漿中細(xì)胞因子IL-4、IL-6、IL-7、IL-12、IL-21、IFN-γ的濃度的檢測后發(fā)現(xiàn),HIV-1單純感染組及HIV-1/HCV合并感染組兩組間血漿中上述細(xì)胞因子的濃度差異無顯著性,但是此兩組研究對象血漿中IL-4、IL-12及IFN-γ的濃度顯著高于正常對照組(P均為0.000),IL-6、IL-21的濃度則顯著低于正常對照組( P均為0.000 ),單純感染組IL-7濃度顯著高于正常對照組(P=0.049),合并感染組IL-7濃度高于正常對照組,但是差異不具有顯著性(P=0.365)。 結(jié)論: 1.在HIV-1感染中,體內(nèi)存在有HIV-1特異性CD4~+T細(xì)胞應(yīng)答,但是其作用強(qiáng)度小于HIV-1特異性CD8~+T細(xì)胞; 2.在HIV-1 /HCV合并感染中,HCV能下調(diào)機(jī)體對HIV-1特異性細(xì)胞應(yīng)答強(qiáng)度,這是否為合并感染者HAART治療療效差的原因之一有待更進(jìn)一步證實(shí); 3. HIV-1感染對人體內(nèi)的IL-4、IL-6、IL-7、IL-12、IL-21和IFN-γ的分泌水平影響顯著,而HCV合并感染未能使上述細(xì)胞因子水平產(chǎn)生進(jìn)一步顯著變化。
【學(xué)位單位】：廣州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類】：R512.91;R512.6
【部分圖文】：

1.2 中國艾滋病流行現(xiàn)狀我國自 1985 年發(fā)現(xiàn)首例艾滋病病毒感染者以來，艾滋病在我國流行經(jīng)歷了三個(gè)階段：1985 年 ~ 1988 年為第一階段，即傳入期，這一階段的感染者主要為外來者，4 年報(bào)告總數(shù)為 22 例；1989 年 ~ 1993 年為第二階段，即播散期，1989年 10 月在云南西南地區(qū)吸毒人群中發(fā)現(xiàn)了 146 例 HIV 感染者標(biāo)志此期的開始。在此期間，大多數(shù) HIV 感染報(bào)道來源于云南的注射毒品者，這一階段共報(bào)告病例 1221 例；1994 年 ~ 現(xiàn)在為第三階段，即增長期，HIV 傳播超出云南省的范圍，全國 HIV 感染報(bào)告數(shù)量急劇上升，在四川（1995 年）、新疆（1996 年）、廣西（1997 年）的吸毒人群中發(fā)現(xiàn)了大量的 HIV 感染者。截至 2009 年 10 月 31日，我國累計(jì)報(bào)告艾滋病病毒感染者和病人 319877 例，其中艾滋病病人 102323例，報(bào)告死亡 49845 例，估計(jì) 2009 年新發(fā)艾滋病病毒感染者 4.8 萬人，性傳播圖1 AIDS全球流行現(xiàn)狀

2.3 HIV-1 編碼的蛋白組特異性抗原基因 ( group-specific antigen gene , gag ) 編碼病毒的核心蛋白，翻譯時(shí)先形成一個(gè)分子量為 55kD 的前體蛋白，隨后在蛋白酶的作用下被裂解為pol圖3 HIV-1基因組5′LTRgagvifvprvpu / vpxtatenvrevnef3′LTR圖2 HIV-1病毒顆粒

+T細(xì)胞純度的檢測圖1a. 免疫磁珠分選后流式細(xì)胞儀檢測CD4+T細(xì)胞純度0.62%99.38%圖1b. 免疫磁珠分選后流式細(xì)胞儀檢測CD8+T細(xì)胞純度98.74%1.26%

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 金磊;趙清霞;張政;福軍亮;何云;姚金霞;王福生;;HAART治療HIV-1慢性感染兒童外周血特異性CTL的反應(yīng)特點(diǎn)[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2007年02期

2 ;Characteristics of HIV-1-specific CD8 T-cell responses and their role in loss of viremia in children chronically infected with HIV-1 undergoing highly active antiretroviral therapy[J];Chinese Medical Journal;2006年23期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 朱衛(wèi)軍;基于痘苗病毒天壇株的改良載體的研究及HIV-1疫苗的構(gòu)建[D];武漢大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 趙穩(wěn);HIV-1抗原特異性CTL免疫應(yīng)答影響因素的研究[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2010年

2 查慶兵;健康HLA-A2～+供者HCMV特異性CTL的頻率及其表型和功能分析[D];暨南大學(xué);2006年

本文編號：2815234