第一部分:特發(fā)性肺纖維化患者肺組織窖蛋白-1、膠原-Ⅰ、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白的變化及意義 目的 通過比較特發(fā)性肺纖維化( Idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)患者和正常對(duì)照組的肺組織的窖蛋白-1(Cav-1) mRNA和蛋白表達(dá),肌成纖維細(xì)胞表達(dá)標(biāo)志物α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α- smooth muscle actin,α-SMA)、細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)物:膠原-Ⅰ蛋白表達(dá)的變化,初步探討Cav-1與特發(fā)性肺纖維化之間的關(guān)系。 方法 6例特發(fā)性肺纖維化患者肺組織標(biāo)本通過常規(guī)開胸肺活檢獲得,IPF以普通型間質(zhì)性肺炎(UIP)為IPF的病理特征,表現(xiàn)為彌漫的間質(zhì)纖維化,僅輕度的間質(zhì)炎癥,伴蜂窩變區(qū)和成纖維細(xì)胞灶的出現(xiàn);對(duì)照組肺標(biāo)本6例,來自因孤立肺結(jié)節(jié)而行肺葉切除的肺癌患者。免疫組織化學(xué)方法觀察Cav-1表達(dá)差異,并通過測定肌成纖維細(xì)胞標(biāo)志物α-SMA表達(dá)情況,觀察Cav-1變化與細(xì)胞表型之間的關(guān)系。提取IPF患者肺組織和對(duì)照組肺組織的總RNA,經(jīng)RT-PCR觀察Cav-1 mRNA,Western-Blot法檢測Cav-1、膠原-Ⅰ和α-SMA蛋白的表達(dá)變化。 結(jié)果 IPF患者肺組織Cav-1的mRNA和蛋白表達(dá)較對(duì)照組明顯降低,分別為(0.05±0.018 vs 0.65±0.19)和(0.16±0.05 vs 0.81±0.10)(P0.05)。與對(duì)照組相比,IPF患者肺組織膠原-Ⅰ( 0.85±0.109 vs 0.16±0.045)和α-SMA蛋白(0.78±0.084 vs 0.14±0.053)表達(dá)明顯增多(P0.05)。 結(jié)論 IPF患者肺組織Cav-1的mRNA和蛋白表達(dá)明顯減少,而膠原-Ⅰ和α-SMA蛋白表達(dá)增多,提示Cav-1下調(diào)可能與肺間質(zhì)纖維化的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。 第二部分:轉(zhuǎn)換生長因子-β1對(duì)肺成纖維細(xì)胞窖蛋白-1與細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)的影響 目的 通過研究轉(zhuǎn)換生長因子-β1對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞(human fetal lung fibroblasts,以下均簡稱成纖維細(xì)胞)的窖蛋白-1(Cav-1)及細(xì)胞外基質(zhì)表達(dá)的影響,為尋找治療肺間質(zhì)纖維化的尋找新的作用靶點(diǎn)。 方法 體外培養(yǎng)成纖維細(xì)胞,以未加TGF-β1的成纖維細(xì)胞為對(duì)照組,每組3個(gè)細(xì)胞。分別以不同終濃度(2μg/L、5μg/L和10μg/L)TGF-β1處理的成纖維細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,每組至少需5*108細(xì)胞,重復(fù)3次,提取細(xì)胞的總RNA和蛋白,用RT-PCR和Western blot法分別檢測不同濃度TGF-β1刺激3、6、12和24 h后各組成纖維細(xì)胞Cav-1的mRNA及Cav-1、膠原-Ⅰ和α-SMA的蛋白表達(dá)。 結(jié)果 TGF-β1作用成纖維細(xì)胞后, Cav-1的mRNA和蛋白表達(dá)逐漸減少,呈時(shí)間-濃度依賴關(guān)系。TGF-β1作用12 h,5μg/L劑量組,Cav-1的mRNA和蛋白表達(dá)積分吸光度值(0.59±0.06和0.53±0.04)明顯低于對(duì)照組(1.22±0.12和1.45±0.06),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值分別為29.279和95.786,均P0.01);TGF-β1作用24 h,5μg/L劑量組膠原-Ⅰ和α-SMA蛋白表達(dá)的積分吸光度值(1.35±0.09和0.75±0.06)明顯高于對(duì)照組(0.28±0.04和0.18±0.04),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F值分別為81.221和65.477,均P0.01);相關(guān)分析結(jié)果顯示,成纖維細(xì)胞Cav-1的蛋白表達(dá)下調(diào)與膠原-Ⅰ和α-SMA蛋白表達(dá)上調(diào)呈顯著負(fù)相關(guān)(r值分別為-0.923和-0.793,均P0.05)。 結(jié)論 TGF-β1可下調(diào)成纖維細(xì)胞Cav-1 mRNA和蛋白表達(dá),并與膠原-Ⅰ和α-SMA蛋白表達(dá)上調(diào)呈負(fù)相關(guān),提示成纖維細(xì)胞Cav-1下調(diào)可能與肺間質(zhì)纖維化的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)。
【學(xué)位單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R575.2
【部分圖文】：

目的蛋白凈密度/GAPDH凈密度值之比表示目的蛋白的本量為3例。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理-PCR、Western Blot實(shí)驗(yàn)重復(fù) 3次，數(shù)據(jù)用均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差 (xPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組間均值比較采用單因素方.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，以P<0.01認(rèn)為具有顯著性差異結(jié) 果IPF患者肺組織Cav-1 mRNA和蛋白表達(dá)明顯降低IPF 患者肺組織表達(dá) Cav-1 mRNA 較對(duì)照組相比，表達(dá)明6±0.1921 vs 0.0502±0.01821) (p<0.05)。（圖 1a、 1b）

、Western Blot實(shí)驗(yàn)重復(fù) 3次，數(shù)據(jù)用均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差 (x7.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組間均值比較采用單因素方為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，以P<0.01認(rèn)為具有顯著性差異結(jié) 果患者肺組織Cav-1 mRNA和蛋白表達(dá)明顯降者肺組織表達(dá) Cav-1 mRNA 較對(duì)照組相比，表達(dá)明.1921 vs 0.0502±0.01821) (p<0.05)。（圖 1a、 1b）-1 mRNA 在 IPF 患者和對(duì)照組肺組織的表達(dá)

圖 2a：Cav-1 蛋白在 IPF 患者和對(duì)照組肺組織的表達(dá)圖 2b：Cav-1 蛋白在 IPF 患者和對(duì)照組肺組織的表達(dá)差異與對(duì)照組肺組織比較（圖3a），IPF患者肺組織中上皮細(xì)胞的Cav-1蛋白表達(dá)下降（圖3b）；另外，我們注意到，在成纖維細(xì)胞灶內(nèi)的α-SMA陽性（圖3c）的肌成纖維細(xì)胞無Cav-1的表達(dá)（圖3d）。圖3a 正常對(duì)照組肺組織上皮細(xì)胞的表達(dá)cav-1蛋白圖3b IPF患者肺組織中上皮細(xì)胞的cav-1蛋白表達(dá)下降22

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 劉新民，何冰，宿利，趙桂榮;轉(zhuǎn)化生長因子－β對(duì)人胚肺成纖維細(xì)胞膠原表達(dá)的影響[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;1995年05期

本文編號(hào)：2813688