【摘要】：乙型肝炎病毒(HBV)感染呈世界范圍廣泛流行,是危害人民健康和造成國(guó)民經(jīng)濟(jì)損失最嚴(yán)重的疾病之一。乙型肝炎發(fā)病機(jī)理尚未完全闡明,雖臨床抗病毒治療取得一定進(jìn)展,但由于病毒變異快,臨床耐藥較為普遍,乙型肝炎的抗病毒治療任重道遠(yuǎn)。本研究利用表達(dá)譜芯片比較了乙型肝炎病毒感染細(xì)胞(HepG2.2.15)與未感染母本細(xì)胞(HepG2)中基因表達(dá)差異,兩種細(xì)胞中共有1305個(gè)基因表達(dá)差異在2倍以上。這些差異表達(dá)基因主要參與細(xì)胞生理功能、生化反應(yīng)、另有部分基因具有催化活性,參與酶促反應(yīng)。根據(jù)芯片結(jié)果,從差異表達(dá)基因中選取29條與感染及炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答、細(xì)胞功能相關(guān)基因作為候選基因,通過(guò)RT-PCR檢測(cè)其在HepG2.2.15與HepG2細(xì)胞中RNA水平變化,在證實(shí)芯片可靠性同時(shí)關(guān)注感興趣基因表達(dá)差異。從29條候選基因中最終選擇肝細(xì)胞特異性硫酸類肝素3氧磺基轉(zhuǎn)移酶(HS3ST3B1)作為研究對(duì)象,進(jìn)一步研究其在HBV生活周期中的作用。在復(fù)制水平研究中,利用HS3ST3B1真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染HBV穩(wěn)定復(fù)制細(xì)胞HepGH7 96h后HBV復(fù)制受到明顯抑制,該抑制作用呈劑量依賴性。在瞬時(shí)表達(dá)模型中,當(dāng)利用RNA干擾技術(shù)抑制外源性HS3ST3B1表達(dá)后,HBV復(fù)制得到恢復(fù)。應(yīng)用定點(diǎn)突變技術(shù)突變HS3ST3B1關(guān)鍵位點(diǎn)后,HS3ST3B1對(duì)HBV復(fù)制的抑制作用喪失。通過(guò)兩種不同HBV感染模型證實(shí)HS3ST3B1能夠特異性抑制HBV復(fù)制。在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的研究同樣發(fā)現(xiàn)HS3ST3B1導(dǎo)致HBV表面蛋白及核心蛋白表達(dá)下調(diào)、總RNA水平抑制,利用雙熒光素酶報(bào)告對(duì)HBV不同啟動(dòng)子活性進(jìn)行發(fā)現(xiàn)HS3ST3B1并未對(duì)HBV 4種啟動(dòng)子產(chǎn)生影響,提示HBV對(duì)轉(zhuǎn)錄及翻譯水平的抑制可能發(fā)生在轉(zhuǎn)錄后水平。綜上,本研究以表達(dá)譜芯片研究為基礎(chǔ),通過(guò)實(shí)驗(yàn)分析驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)一種新的HBV抑制因子HS3ST3B1,細(xì)胞研究發(fā)現(xiàn)HS3ST3B1對(duì)HBV復(fù)制具有強(qiáng)烈而特異的抑制作用。HS3ST3B1這一特點(diǎn)使其有望作為一種新興的抗病毒藥物應(yīng)用于臨床。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R512.62
【圖文】：

后用于雜交分析。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中通過(guò)設(shè)定 OligoB2、Poly-A Controlybridization Controls 陽(yáng)性對(duì)照、比較看家基因信號(hào)值及 3’/5’、平均背景值與值比值、Present Percent（P call %）數(shù)值判定芯片檢測(cè)是否合格。本研究最片結(jié)果如下：張禎禎：硫酸類肝素3氧磺基轉(zhuǎn)移酶B1抑制HBV復(fù)制的實(shí)驗(yàn)研究

情況進(jìn)行 RT-PCR 驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)：在 29 條檢測(cè)基因中，有 24 條檢測(cè)基因與芯片表達(dá)相一致，假陽(yáng)性率為 17.2%。（圖 1-2）博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 2011年 第12期 醫(yī)藥衛(wèi)生科技輯 E0

圖 1-6：HS3ST3B1 在 HepG2.2.15 及 HepG2 中 mRNA 及蛋白表達(dá)水平分析。左圖為HS3ST3B1 mRNA 水平分析，右圖為蛋白水平分析Fig 1-6: mRNA and protein level analysis of HS3ST3B1 between HepG2.2.15 and HepG2. Leftpanel: HS3ST3B1 mRNA change in 2 cell lines; Right panel: protein differentiation ofHS3ST3B1 in 2 cells.3．討論在疾病發(fā)生過(guò)程中，宿主與病原體之間的博弈決定病情轉(zhuǎn)歸，了解宿主-病原體相互作用有助于認(rèn)識(shí)疾病發(fā)生機(jī)理，同時(shí)也為疾病的治療提供幫助。高通量芯片技術(shù)的推廣應(yīng)用，加速了宿主-病原體相互作用的研究。從最初的表達(dá)譜芯片開(kāi)始，到近年來(lái)廣泛應(yīng)用的蛋白芯片、甲基化芯片、microRNA 芯片，這些芯片的應(yīng)用極大便利了對(duì)宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)錄、表達(dá)、以及轉(zhuǎn)錄表達(dá)調(diào)控水平的研究。生物信息學(xué)及系統(tǒng)生物學(xué)將芯片所得結(jié)果進(jìn)行歸納處理，得到與疾病相關(guān)的基因和基

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 ;MicroRNA: Biological and Computational Perspective[J];Genomics Proteomics & Bioinformatics;2005年02期

2 ;Targeted ribonuclease can inhibit replication of hepatitis B virus[J];World Journal of Gastroenterology;2003年02期

本文編號(hào)：2799054