【摘要】： 幽門螺桿菌(helicobacter pylori，Hp)是上消化道疾病的主要致病菌，在人群中的感染率較高，目前已知其與慢性胃炎、消化性潰瘍、胃癌、胃粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤關(guān)系密切。為探討Hp的致病機(jī)理及Hp感染后機(jī)體的病理生理變化，許多學(xué)者對有關(guān)的熱休克蛋白(heat shock protein，HSP)做了大量研究，發(fā)現(xiàn)Hp本身含有HSP，可能作為致病因子在Hp感染時發(fā)揮作用；而且Hp感染尚可刺激胃粘膜細(xì)胞產(chǎn)生不同的HSP，在Hp相關(guān)性胃疾病中發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用。 生物細(xì)胞在受熱和其他損害因素如缺血、缺氧、重金屬離子、病毒感染、DNA損傷等作用下發(fā)生熱休克反應(yīng)，應(yīng)激啟動一類新的蛋白質(zhì)合成基因—熱休克蛋白基因，合成熱休克蛋白。HSP是一類高度保守的蛋白質(zhì)，其主要功能是在應(yīng)激狀態(tài)下保護(hù)細(xì)胞生命活動所必需的蛋白以維持細(xì)胞生存。熱休克蛋白通常與具有不同功能的多種蛋白質(zhì)在細(xì)胞中形成復(fù)合體并通過復(fù)合體的形成或者解離而參與有關(guān)蛋白的折疊、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸以及蛋白質(zhì)降解等過程，以調(diào)節(jié)靶蛋白的活性和功能，但又不參與靶蛋白的組成，因此又被認(rèn)為是一種分子伴侶(molecular chaperon)。 Grp94(glucose regulation protein)、Grp78、PDI(protein disulfide isomerase，蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶)是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶家族重要成員。在新生肽鏈合成的早期階段，Grp94與新生肽鏈形成穩(wěn)定的復(fù)合物協(xié)助其折疊和裝配，它也能與尚未裝配或錯誤折疊的蛋白質(zhì)形成復(fù)合物，同時在腫瘤細(xì)胞中具有抗原提呈作用。Grp78又稱Bip(immunoglobulin binding protein，免疫球蛋白結(jié)合蛋白)，存在于各類哺乳動物細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中，在應(yīng)激狀況下，能與蛋白質(zhì)結(jié)合，維系新合成的蛋白分子的恰當(dāng)構(gòu)型，防止在正確的多聚體形成前，蛋白亞單位不恰當(dāng)?shù)恼郫B和聚集；陪伴蛋白分子在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)、跨膜，參與蛋白質(zhì)的折疊、伸展及多聚復(fù)合體的組裝；可把異常蛋白質(zhì)運(yùn)輸?shù)絻?nèi)質(zhì)網(wǎng)降解系統(tǒng)，使之降解，以免對細(xì)胞造成進(jìn)一步損害；能重新激活某些酶的作用，以維護(hù)細(xì)胞的功能和生存。PDI作為酶催化蛋白質(zhì)分子中二硫鍵的形成，作為分子伴侶在蛋白質(zhì)的翻譯及翻譯后進(jìn)行的轉(zhuǎn)運(yùn)過程中起著重要作用。 目前還沒有 HP感染與 Gp94、Grps＊DI關(guān)系的有關(guān)研究報(bào)道，鑒此， 我們研究了幽門螺桿菌感染與未感染胃粘膜上皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)超微結(jié)構(gòu)的改 變，并檢測了胃粘膜組織中 Grp94、Grp78、PDI mRNA水平及蛋白水平，探討 它們在Hp感染中的作用。結(jié)果如下： 應(yīng)用透射電鏡觀察了12例幽門螺桿菌感染胃粘膜標(biāo)本，5例無幽門螺 桿菌感染胃粘膜標(biāo)本。以快速尿素酶試驗(yàn)及Giemsa染色確立有無Hp感 染。胃鏡檢查時于胃竇部取材，2．5％戊二醛固定，經(jīng) 1％餓酸后固定，梯度 乙醇和丙酮脫水，EPOns 12樹脂包埋，切片后電子染色，透射電鏡下觀察。 無幽門螺桿菌感染胃粘膜上皮細(xì)胞微絨毛規(guī)整用列整齊，線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng) 形態(tài)完整。而幽門螺桿菌感染胃粘膜上皮微絨毛大量脫落有列紊亂，細(xì)胞 內(nèi)出現(xiàn)空泡變性，線粒體破裂，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張、腫脹明顯，有的破裂、核糖體脫 落。提示，幽門螺桿菌感染可破壞胃粘膜上皮細(xì)胞，而在胞漿中占重要地位 的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的改變也很明顯，這可能影響內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成蛋白及分子伴侶。 為進(jìn)一步了解一些內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶在幽門螺桿菌感染中的作用，應(yīng)用 半定量RT－PCR方法分別檢測了感染與未感染幽門螺桿菌的胃粘膜組織 中 Gp94、Grps＊DI mRNA的表達(dá)情況。胃鏡下于胃竇部取材2塊，TRIzol 提取總RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，以p－actin為內(nèi)參進(jìn)行PCR反應(yīng)，＊5％ 瓊脂糖電泳后觀察條帶，并拍照、計(jì)算條帶密度值。未感染組28例，Gp4。 Gnds、PDI mRNA表達(dá)量分別為 0．4237。0．0552、0．8038。0·05＊·5704。 0．0794；感染組 32例，Gp4、Grps、PDI mRNA表達(dá)量分別為 0．8823。0． 0817、二．1586土0．0839、互．0642 SO．1533。兩組相比 Grp94、Grps、PDI mR－ NA的表達(dá)量均有顯著差異h＜0．of人感染組 Gp4人rp78＊DI mRNA表 達(dá)明顯增加。提示，正常情況下胃粘膜組織即有Gp4、Grps、PDI mRNA 的表達(dá)，在幽門螺桿菌感染后它們的表達(dá)量明顯增加。 應(yīng)用lstem blot方法分別檢測了感染與未感染組胃粘膜組織中 Gp94、Grps＊DI蛋白的表達(dá)情況。胃鏡下胃竇部取材 2塊，提取蛋白后 定量，SDS－PAGE電泳，轉(zhuǎn)膜、雜交ECL反應(yīng)，拍片，掃描并計(jì)算條帶密度 值。未感染組28例，Gp4、Gnds＊DI蛋白表達(dá)量分別為 0．4271 LO． 0361、0．4345 to．0545、0．5198】0．0379；感染組32例，Gp94、Grps、PDI蛋 白表達(dá)量分別為0．67 12 d 0．0719＊．6204 t 0．0412、0＊252 to．0321。兩組 相比 Gd4、Gp78、PDI蛋白表達(dá)量均有顯著差異（p＜0．ofL感染組 ·2· Gp4、Grps＊DI蛋白表達(dá)量明顯增加。提示，正常情況下胃粘膜組織可 以合成 Gp4、Grps、PDI蛋白，幽門螺桿菌感染可使胃粘膜增加合成 Gu、Grps＊DI蛋白，這可能有利于胃粘膜的自身保護(hù)作用。 我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，幽門螺桿菌感染可破壞胃粘膜上皮細(xì)胞，而在胞 漿中占重要地位的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R573
【圖文】：

p一aGrpFi夕RT一PCRproduetofGrp94and日一aetin圖ZG甲94RT一PCR產(chǎn)物l:Marker，自上至T為soobp，700bp，6()obp，soobv，400bp，300b2，3，4:Hp陽性組5，6，7:Hp陰性組G甲94為270bp，p一actin為535bpABCDEF

G印78p一aetin圖4一.曰門.自目叭口甲.口...口.....口一..口一Fi妙WestemblotanalysisforG叨se翔ressionWestemblot檢測Hp陽性與陰性組Grp78蛋白表達(dá)A，B，C:Hp陰性組標(biāo)本D，E，F(xiàn):Hp陽性組標(biāo)本討論自70年代美國學(xué)者發(fā)現(xiàn)HSP以來，已經(jīng)認(rèn)識到4族HSPs，即HS即O家族、HS即O家族、HSP6O家族和小HSP家族。其中HSP70家族的應(yīng)激蛋白最多、最重要，幾乎在所有生物的應(yīng)激細(xì)胞中都被高度地誘導(dǎo)。胃粘膜是熱休克反應(yīng)的代表場所

i薛E卻ressionofPDIproteinwithandwituou圖2Hp感染與未感染組胃粘膜中PDI蛋染組，2為Hp感染組。Hp感染組PDI蛋白

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 李明峰,凌貞,張迎春,馬愛英,孫建新,施惠娟,吳祥甫;幽門螺桿菌熱休克蛋白A基因的克隆、表達(dá)及免疫原性研究[J];生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào);1999年03期

2 任宏宇,易粹瓊,張錦坤;幽門螺桿菌感染胃粘膜的PCNA和HSP70表達(dá)[J];同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1999年02期

3 易屏,李國成,劉勝洪,羅樹星,陶秀良;HSP_(72)、HSPB在幽門螺桿菌感染的十二指腸球部潰瘍患者胃粘膜中的表達(dá)[J];中國中西醫(yī)結(jié)合脾胃雜志;2000年06期

本文編號：2788601