【摘要】：目的建立一種簡(jiǎn)便的方法以定量分析移植細(xì)胞在動(dòng)物臟器中的動(dòng)態(tài)分布情況,并且利用該方法比較人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549細(xì)胞和人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞(human umbilical cord blood mononuclear cells, huMNCs)在四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)誘導(dǎo)的小鼠急性損傷肝臟中定植能力的差異,探討huMNCs在急性損傷小鼠肝臟中定植能力。 方法用羧基熒光素二乙酸鹽琥珀酰亞胺酯(Carboxyfluorescin Diacetate Succinimidyl Ester, CFSE)標(biāo)記活細(xì)胞,測(cè)定不同條件下熒光信號(hào)值與細(xì)胞數(shù)量間的相關(guān)性。采用CC1410mL/kg腹腔注射制作小鼠肝損傷模型,隨機(jī)分為肝損傷A549移植組(A組),肝損傷huMNCs移植組(B組),正常小鼠A549移植組(C組),正常小鼠huMNCs移植組(D組)和肝損傷動(dòng)物鹽水對(duì)照組(E組)。用CFSE標(biāo)記細(xì)胞,動(dòng)物注射CC14后24h經(jīng)脾臟緩慢注入CFSE染色的huMNCs或A549細(xì)胞懸液100ul,細(xì)胞數(shù)量5×106。對(duì)照組同法注入等體積生理鹽水。各組動(dòng)物分別于注射細(xì)胞后3h、6h、12h、24h處死,肝、脾、肺等臟器制成勻漿,取50u1測(cè)定熒光信號(hào)值,計(jì)算相應(yīng)臟器樣品所含染色細(xì)胞數(shù),并換算成所占注入細(xì)胞總量的百分比。 結(jié)果肝臟中染色細(xì)胞滯留百分比A、C組之間各時(shí)間點(diǎn)數(shù)據(jù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t3=1.793, p3=0.147; t6=0.896p6=0.421; t12=0.070, p12=0.948; t24=1.136, p24=0.338)。A組間3h,24h(45.86%±0.90%,0.83%±0.09%)與B組(44.16%±0.57%,0.85%±0.07%)數(shù)據(jù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t3=2.770, p3=0.0503; t24=0.309, p24=0.773)。 B組3h,24h (44.16%±0.57%,0.85%±0.07%)與D組(44.12%±6.03%,0.88%±0.07%)數(shù)據(jù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t3=0.076, a=0.942; t24=0.397, p24=0.712)。A組6h,12h細(xì)胞滯留百分比(29.00%±0.58%；2.96%±±0.36%)低于B組(60.15%±1.54%,20.74%±0.97%),數(shù)據(jù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t6=32.738, p6=0.00; t12=29.829, p12=0.00).B組6h,12h細(xì)胞滯留百分比(60.15%±1.54%,20.74%±0.97%)高于D組(15.74%±0.90%,7.56%0±1.91%),數(shù)據(jù)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t6=42.989, p6=0.00, t12=23.184, p12=0.00).脾臟染色細(xì)胞定植百分比各時(shí)間點(diǎn)各組間數(shù)據(jù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(tab3=0.990, tab6=0.238, tab12=1.874, tab24=1.955, tac3=1.151,tac6=0.159, tac12=0.103,tac24=1.099, tbd3=2.107, tbd6=2.082, tbd12=1.021, tbd24=1.444,p均0.05)肺臟染色細(xì)胞定植百分比各時(shí)間點(diǎn)各組間數(shù)據(jù)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(tab3=0.922,tab6=0.301,tab12=1.078,tab24=0.500, tac3=0.764, tac6=0.029, tac12=0.805, tac24=1.224, thd3=0.513,tbd6=1.098, thd12=1.162, tbd24=0.707,p均0.05)。 結(jié)論huMNCs能夠在受損肝臟中有一定程度的定植,但定植時(shí)間短暫,細(xì)胞輸入12小時(shí)后在肝臟中的滯留情況不再有差異。染色細(xì)胞在脾和肺中短暫滯留后迅速消散。
【學(xué)位授予單位】：浙江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R575

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2749127