【摘要】： 目的:觀察載肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)的聚乳酸-O-羧甲基殼聚糖(PLA-O-CMC)納米粒子培養(yǎng)的大鼠肝細(xì)胞腹腔內(nèi)移植對(duì)急性肝衰竭(ALF)大鼠的治療效果并探討其作用機(jī)制。 方法:D-氨基半乳糖(D-gal)腹腔內(nèi)注射(1.2g/kg)制作大鼠ALF模型,48h后分別將5ml(含5.0×10~7個(gè))常規(guī)膠原培養(yǎng)24h的大鼠肝細(xì)胞(Ⅰ組)、PLA-O-CMC納米粒子培養(yǎng)24h的大鼠肝細(xì)胞(Ⅱ組)、載HGF的PLA-O-CMC納米粒子培養(yǎng)24h的大鼠肝細(xì)胞(Ⅲ組)移植到模型大鼠腹腔內(nèi),以5ml PLA-O-CMC納米粒子培養(yǎng)24h的大鼠肝細(xì)胞腹腔移植加每日靜脈注射HGF 10μg/kg×7d(Ⅳ組)和5ml混合細(xì)胞培養(yǎng)液腹腔內(nèi)注入(Ⅴ組)作為對(duì)照。觀察受體大鼠14d存活率、肝功能、肝臟的病理變化及有絲分裂指數(shù)和肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化;觀察移植肝細(xì)胞病理變化。免疫組化法檢測(cè)受體肝Ki-67抗原、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)和溴脫氧核苷尿嘧啶(BrdU)摻入標(biāo)記指數(shù)。酶聯(lián)免疫法檢測(cè)受體大鼠血清和肝組織HGF濃度。流式細(xì)胞儀檢測(cè)受體大鼠肝細(xì)胞增殖指數(shù)以及培養(yǎng)和移植肝細(xì)胞凋亡率、壞死率及存活率。 結(jié)果:移植后14d ALF大鼠的存活率:Ⅰ～Ⅴ組分別為50.00%,68.75%,81.25%,75.00%,18.75%。各移植組高于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。移植后24h始,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組各項(xiàng)肝功能指標(biāo)開(kāi)始好轉(zhuǎn),與Ⅴ組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);移植5d時(shí)差異最為明顯,Ⅲ組ALB顯著高于其余各組(P0.05);至移植后7d,各組間除ALT外,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Ⅲ組的肝功能和肝臟病理?yè)p害恢復(fù)最快、最好,其次為Ⅳ組、Ⅱ組、Ⅰ組,Ⅴ組恢復(fù)最慢、最差。Ⅲ組移植肝細(xì)胞存活時(shí)間較長(zhǎng),炎癥浸潤(rùn)較輕。Ⅲ組肝小葉結(jié)構(gòu)恢復(fù)較快,肝細(xì)胞電鏡下核分裂相明顯,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)密集,線粒體較多。移植后各組均有肝再生表現(xiàn),移植組好于對(duì)照組,納米組好于非納米組。Ⅲ組有絲分裂指數(shù)、Ki-67、PCNA、BrdU標(biāo)記指數(shù)、肝細(xì)胞增殖指數(shù)均高于其余各組,部分時(shí)段的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各組HTx后血清和肝組織HGF濃度均有升高,3d時(shí)增高最為明顯。Ⅲ組肝組織HGF濃度高于其他各組,Ⅳ組血清HGF濃度高于其他各組(P0.05)。隨著時(shí)間延長(zhǎng),各組肝細(xì)胞活率下降,凋亡率和壞死率上升,Ⅲ組肝細(xì)胞活率最高,凋亡率最低。移植后3d時(shí)差異最為明顯,Ⅲ組和Ⅳ組的肝細(xì)胞活率顯著高于Ⅰ組且Ⅲ組高于Ⅱ組,而Ⅲ和Ⅳ組凋亡率顯著低于Ⅰ組,且Ⅲ組低于Ⅱ組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論:應(yīng)用載HGF的PLA-O-CMC納米粒子培養(yǎng)的大鼠肝細(xì)胞腹腔內(nèi)移植治療D-gal誘導(dǎo)的ALF大鼠能顯著逆轉(zhuǎn)肝功能和提高生存率;其通過(guò)促進(jìn)受體肝再生,抑制移植肝細(xì)胞凋亡,起到較好的治療作用。
【學(xué)位授予單位】：南通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R575.3
【圖文】：

南通大學(xué)碩士研究生論文 結(jié)果附 圖0.00.10.20.30.40.50.60.70.80.91.00 1d 3d 5d 7d 14dHTx術(shù)后天數(shù)存生率Ⅰ組 Ⅱ組Ⅲ組 Ⅳ組Ⅴ組圖 1 HTx 后 ALF 大鼠存活率比較折線圖

南通大學(xué)碩士研究生論文 結(jié)果附 圖0.00.10.20.30.40.50.60.70.80.91.00 1d 3d 5d 7d 14dHTx術(shù)后天數(shù)存生率Ⅰ組 Ⅱ組Ⅲ組 Ⅳ組Ⅴ組圖 1 HTx 后 ALF 大鼠存活率比較折線圖

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2730404