【摘要】：目的:觀察二氫楊梅素(Dihydromyrieetin,DMY)對(duì)過(guò)氧化氫(Hydrogen peroxide solution,H_2O_2)誘導(dǎo)的人正常肝細(xì)胞系L02肝細(xì)胞氧化損傷的影響及機(jī)制,為肝損傷的防治提供新的途徑和策略。方法:培養(yǎng)人正常肝細(xì)胞系L02肝細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),第一步:采用10、20、40、80、160和320μg/m L DMY預(yù)處理L02肝細(xì)胞24 h后,以H_2O_2(200μmol/L)處理L02肝細(xì)胞12 h。光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)的變化,采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)法檢測(cè)細(xì)胞活力,比色法測(cè)量細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)的水平,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,比色法測(cè)量細(xì)胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平。采用Western blot檢測(cè)L02肝細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ERS)標(biāo)志蛋白葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)和C/EBP同源蛋白(CCAAT/enhancerbinding protein homologous protein,CHOP)的表達(dá)。第二步:采用2μg/m L內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑衣霉素處理LO2細(xì)胞30 min后,以80μg/m L DMY預(yù)處理L02肝細(xì)胞24 h,再以H_2O_2(200μmol/L)處理L02肝細(xì)胞12 h,MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡,比色法測(cè)量細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH的水平。結(jié)果:1、DMY(10、20、40、80、160和320μg/m L)單獨(dú)處理沒(méi)有明顯影響細(xì)胞形態(tài)。H_2O_2處理后細(xì)胞形態(tài)明顯改變,大部分細(xì)胞呈圓形,部分細(xì)胞呈現(xiàn)凋亡形態(tài)學(xué)特征,染色體聚集在細(xì)胞核膜周邊,胞漿收縮,細(xì)胞變小。40、80、160和320μg/m L DMY預(yù)處理改善了H_2O_2誘導(dǎo)的細(xì)胞形態(tài)變化。2、DMY(10、20、40、80、160和320μg/m L)單獨(dú)處理與空白對(duì)照組比較細(xì)胞活力差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。與H_2O_2組比較,DMY(40、80、160和320μg/m L)+H_2O_2組細(xì)胞的活力增加(均P0.05)。與H_2O_2組比較,DMY(10、20μg/m L)+H_2O_2組細(xì)胞活力的差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。3、與空白對(duì)照組比較,H_2O_2組細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞上清液中LDH水平、細(xì)胞中MDA和ROS水平均增加(均P0.05);與H_2O_2組比較,DMY(80μg/m L)+H_2O_2組細(xì)胞凋亡率、細(xì)胞上清液中LDH水平、細(xì)胞中MDA和ROS水平均降低(均P0.05)。4、與空白對(duì)照組比較,H_2O_2組細(xì)胞中細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)相關(guān)蛋白CHOP和GRP78表達(dá)增加(均P0.05);與H_2O_2組比較,DMY(80μg/m L)+H_2O_2組細(xì)胞中CHOP和GRP78的表達(dá)下降(均P0.05)。5、與H_2O_2+DMY(80μg/m L)組比較,H_2O_2+DMY(80μg/m L)+衣霉素(2μg/m L)組細(xì)胞活力降低(P0.05),細(xì)胞凋亡率和細(xì)胞培養(yǎng)液上清中LDH活性增加(均P0.05)。結(jié)論:DMY通過(guò)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激保護(hù)H_2O_2誘導(dǎo)的人正常肝細(xì)胞L02氧化損傷。
【圖文】：

3-4 DMY 和 H2O2對(duì) L02 細(xì)胞上清液 LDH 活性的0.05，與空白對(duì)照組比較；#P㩳0.05，與 H2O2組2對(duì) L02 細(xì)胞中 ROS 水平的影響DMY 預(yù)處理 L02 肝細(xì)胞 24 h 后，再用 2h。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中 ROS 水平對(duì)照組比較，H2O2組細(xì)胞中細(xì)胞中 ROS DMY+ H2O2組細(xì)胞中 ROS 水平降低（P<

3-4 DMY 和 H2O2對(duì) L02 細(xì)胞上清液 LDH 活性的0.05，，與空白對(duì)照組比較；#P㩳0.05，與 H2O2對(duì) L02 細(xì)胞中 ROS 水平的影響MY 預(yù)處理 L02 肝細(xì)胞 24 h 后，再用 2。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞中 ROS 水平照組比較，H2O2組細(xì)胞中細(xì)胞中 ROSMY+ H2O2組細(xì)胞中 ROS 水平降低（P
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R575

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2707474