【摘要】：目的:觀察夏枯草硫酸多糖(Prunella vulgaris sulfated polysaccharide,PVSP)對TGF-β_1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)誘導活化的大鼠肝星狀T6細胞(HSC-T6)的作用,同時探索PVSP四氯化碳(carbon tetrachaloride,CCl_4)所致大鼠肝纖維化的作用,并探討其部分相關(guān)機制。方法:體外培養(yǎng)HSC-T6細胞,用不同濃度的PVSP(50、100、200μg/ml)作用于TGF-β_1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)誘導活化的HSC-T6細胞,采用細胞增殖與活性法(CCK8)測定PVSP對HSC-T6細胞增殖的影響;采用熒光定量PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測HSC-T6細胞中α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)和I型膠原(Col-I)mRNA和蛋白的相對表達量。采用40%CCl_4-橄欖油溶液腹腔注射誘導大鼠肝纖維化模型,將大鼠隨機分為5組,分別為正常對照組、秋水仙堿陽性對照組(0.25 mg/kg)、PVSP高劑量組(300 mg/kg)和PVSP低劑量組(100 mg/kg)和模型組。酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法分別測定各組大鼠血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)、透明質(zhì)酸(hyaluronic acid,HA)、層黏連蛋白(laminin,LN)、III型前膠原(procollagen-III-peptide,PC-III)、IV膠原(type IV collagen,C-IV)的含量;采用蘇木素-伊紅(hematoxylin and eosin,HE)及天狼猩紅染色觀察大鼠肝組織病理學改變。此外,采用RT-PCR和免疫組織化學法檢測大鼠肝組織中α-SMA、Col-I和TGF-β_1 mRNA及蛋白的表達,并采用Western blot檢測大鼠肝組織中Smad3、Smad2/3和Smad7蛋白的表達。結(jié)果:細胞實驗顯示,PVSP可抑制TGF-β_1誘導的HSC-T6細胞的增殖(P0.05);與TGF-β組相比,PVSP可減少HSC-T6細胞α-SMA和Col-I mRNA和蛋白的相對表達量(P0.05或P0.01)。體內(nèi)動物實驗顯示,模型組大鼠血清中ALT、AST、HA、LN、PC-III和C-IV的含量均顯著高于正常組(P0.05或P0.01);與模型組比較,PVSP組大鼠血清ALT、AST、HA、LN、PC-III和C-IV的含量顯著降低(P0.05),且高劑量作用比較明顯(P0.05)。病理學結(jié)果顯示,PVSP可減輕大鼠肝臟組織膠原沉積及減輕大鼠肝纖維化程度。模型組大鼠肝組織α-SMA、Col-I和TGF-β_1 mRNA及蛋白的表達高于正常組(P0.05或P0.01);與模型組相比,PVSP組α-SMA、Col-I和TGF-β_1 mRNA及蛋白明顯低于模型組(P0.05),且高劑量組作用明顯(P0.05)。模型組大鼠肝組織中Smad3和Smad2/3蛋白表達顯著高于正常組(P0.05或P0.01),而Smad7蛋白表達顯著低于正常組(P0.05);與模型組相比,PVSP組大鼠肝組織中Smad3和Smad2/3明顯增加(P0.05),Smad7蛋白表達減少(P0.05),且高劑量作用比較明顯(P0.05)。結(jié)論:PVSP可抑制TGF-β_1誘導的大鼠肝星狀細胞的活化;并對CCl_4所致的大鼠肝纖維化有保護作用,其作用機制可能通過調(diào)控TGF-β_1/Smads信號通路,從而抑制HSC增殖與活化,減少ECM生成及促進其降解,最終起到抗纖維化的作用。本研究為PVSP應(yīng)用于臨床提供了理論基礎(chǔ),并鼓勵進一步的基礎(chǔ)實驗及臨床實驗來開發(fā)治療肝纖維化的新藥。
【圖文】：

1w SA 軟件分析蛋白的相對表達量：先計算出每對應(yīng)的內(nèi)參蛋白條帶亮度值的比值，得出的就；然后比較各組之間校正后的目的蛋白表達強的蛋白的相對表達強度，并繪制柱狀圖。.0 統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析，Graphpad Prism 6 x s表示，比較采用單因素方差分析，組間多重異有統(tǒng)計學意義。-T6 細胞增殖的影響C-T6 細胞 48 h 后，，TGF-β1能顯著刺激 HSC-T6 細50、100、200 μg/ml 處理后，HSC-T6 細胞的增殖均200 μg/ml 作用明顯（P < 0.05）。見圖 1。

天津醫(yī)科大學碩士學位論文 一、夏枯草硫酸多糖對 TGF-β1誘導的大鼠肝星狀細胞的影響表 4 PVSP 對 HSC-T6 細胞中 α-SMA、Col-I mRNA 相對表達量的影響（ x s，n=3）組別 質(zhì)量濃度/(μg/ml) α-SMA Col-I對照 - 1.00 0.13 1.00 0.08PVSP 50 5.09 0.46 4.39 0.84100 3.58 0.28# △2.99 0.19# △200 2.51 0.23#1.52 0.16##TGF-β110 (ng/ml) 6.40 0.89*5.12 0.92**注：與對照組比較*P < 0.05，**P < 0.01；與 TGF-β1組比較#P < 0.05，##P < 0.01；與 PVSP50 μg/ml 組比較△P < 0.05；與 PVSP100 μg/ml 組相比★P < 0.05
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R575.2

【參考文獻】

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本文編號：2701345