【摘要】：潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)是一種以腹痛、腹瀉、黏液膿血便為特征的結(jié)腸直腸慢性非特異性炎癥。過(guò)去認(rèn)為歐美UC多見(jiàn),亞非少見(jiàn);1978年以來(lái)流行病學(xué)資料顯示,我國(guó)UC的發(fā)病率和患病率呈逐年增加趨勢(shì),病因及發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,治療困難。大量研究表明免疫反應(yīng)異常參與了UC的發(fā)病,其中對(duì)淋巴細(xì)胞或抗原遞呈細(xì)胞的作用研究頗多,而中性粒細(xì)胞在UC致病中的作用鮮有報(bào)道。中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)是中性粒細(xì)胞活化并釋放的產(chǎn)物,主要參與組織損傷,在急性肺損傷、肺氣腫、關(guān)節(jié)炎等疾病中的作用已有報(bào)道。本課題旨在觀察NE抑制劑對(duì)BALB/c小鼠UC的作用,探討NE在小鼠UC發(fā)病中的作用。 [目的] 1.探討UC小鼠血漿及結(jié)腸組織中NE的表達(dá)。 2.探討NE抑制劑干預(yù)對(duì)小鼠UC的預(yù)防和治療作用。 [方法] 1.建立UC小鼠模型、分組及干預(yù):52只健康雄性BALB/c小鼠隨機(jī)分為4組:①正常對(duì)照組(N組,n=12);②實(shí)驗(yàn)組(UC組,n = 12);③實(shí)驗(yàn)組+ONO-5046低劑量干預(yù)(UC+L組,n = 14);④實(shí)驗(yàn)組+ONO-5046高劑量干預(yù)(UC+H組,n = 14)。UC組:予5% DSS溶液自由飲用建立UC小鼠模型,N組:自由飲用蒸餾水9天。干預(yù):UC組:實(shí)驗(yàn)第0天起腹腔注射PBS 0.2ml,bid×9天,實(shí)驗(yàn)第1天起予DSS飲用6天、再予蒸餾水飲用2天。UC+L和UC+H組:實(shí)驗(yàn)第0天起腹腔注射ONO-5046溶液0.2ml(ONO-5046 25mg/kg或50mg/kg,溶于0.2ml PBS),bid×9天,余處理同UC組。分別于實(shí)驗(yàn)的第5d及第9d分批處死各組小鼠。 2.觀察指標(biāo):包括小鼠體重、糞便性狀、便血、疾病活動(dòng)指數(shù)、結(jié)腸組織學(xué)評(píng)分。 3.留取所有小鼠血漿及結(jié)腸組織標(biāo)本,ELISA法分別檢測(cè)小鼠血漿及結(jié)腸組織培養(yǎng)上清液中NE的濃度及含量,Western Blot法測(cè)定各結(jié)腸組織中NE的蛋白表達(dá)。 [結(jié)果] 1.實(shí)驗(yàn)第7d(飲DSS 6d),與N組比較,UC組小鼠體重下降明顯(P0.01),糞便性狀評(píng)分、便血評(píng)分及疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分顯著升高(P0.001)。 2.體重:與N組比較,實(shí)驗(yàn)第5d(飲DSS 4d),各組小鼠體重均降低(P0.05);第9d(停用DSS 2d),UC+H組與N組無(wú)差異(P0.05)。與UC組比較,UC+L組體重略增加(P0.05),UC+H組體重明顯增加(P0.05),UC+H組高于UC+L組(P0.05)。 3.糞便性狀評(píng)分:與N組比較,實(shí)驗(yàn)第5d,各組評(píng)分均增高(P0.05);第9d,各組評(píng)分均顯著增高(P0.01)。與UC組比較,UC+L組評(píng)分稍下降(P0.05),實(shí)驗(yàn)第5d,UC+H組下降(P0.05),低于UC+L組(P0.05),第9d,UC+H組顯著下降(P0.01),明顯低于UC+L組(P0.01)。 4.便血評(píng)分:與N組比較,實(shí)驗(yàn)第5d,各組評(píng)分無(wú)差異(P0.05);第9d,UC組評(píng)分顯著升高(P0.001)。與UC組比較,UC+L組評(píng)分稍下降(P0.05),UC+H組顯著下降(P0.01),UC+H組低于UC+L組(P0.05),均高于N組(P0.05)。 5.疾病活動(dòng)指數(shù)評(píng)分:與N組比較,實(shí)驗(yàn)第5d,各組評(píng)分均增高(P0.01);第9d,各組評(píng)分均顯著增高(P0.05)。與UC組比較,UC+L組評(píng)分稍下降(P0.05),實(shí)驗(yàn)第5d,UC+H組下降(P0.05),低于UC+L組(P0.05),第9d,UC+H組顯著下降(P0.01),明顯低于UC+L組(P0.01)。 6.結(jié)腸組織學(xué)評(píng)分:與N組比較,實(shí)驗(yàn)第5d、第9d,UC組明顯升高(P0.01),第9d較第5d更加升高(P0.05)。與UC組比較,UC+L組評(píng)分稍降低(P0.05),UC+H組明顯降低(P0.01),且UC+H組低于UC+L組(P0.01),仍均高于N組(P0.01)。 7.血漿NE濃度:與N組相比,實(shí)驗(yàn)第5d、第9d,UC組NE明顯升高(P0.01),第9d較第5d進(jìn)一步升高(P0.05)。與UC組相比,UC+L組稍降低(P0.05),UC+H組顯著降低(P0.01),UC+H組低于UC+L組(P0.01);第5d,均高于N組(P0.01),第9d,UC+H組與N組無(wú)差異(P0.05)。 8.結(jié)腸組織培養(yǎng)上清NE含量:與N組相比,實(shí)驗(yàn)第5d、第9d,UC組顯著增加(P0.01),第9d較第5d進(jìn)一步增加(P0.01)。與UC組相比,UC+L組NE含量稍下降(P0.05),UC+H組顯著下降(P0.01),UC+H組低于UC+L組(P0.01),仍均高于N組(P0.01)。 9.遠(yuǎn)端結(jié)腸組織中NE蛋白表達(dá):與N組相比,實(shí)驗(yàn)第5d、第9d,UC組顯著增加(P0.01),第9d較第5d進(jìn)一步增加(P0.05)。與UC組相比,UC+L組NE含量稍下降(P0.05),UC+H組顯著下降(P0.01),UC+H組低于UC+L組(P0.01),仍均高于N組(P0.01)。 10.血漿NE濃度、遠(yuǎn)端結(jié)腸NE蛋白表達(dá)與DAI及組織學(xué)評(píng)分的關(guān)系:實(shí)驗(yàn)第5d及第9d,UC組小鼠血漿NE濃度和遠(yuǎn)端結(jié)腸NE蛋白表達(dá)與DAI評(píng)分和組織學(xué)評(píng)分均有相關(guān)性。 [結(jié)論] 1. DSS飲用6天時(shí)UC組小鼠體重明顯下降、糞便性狀評(píng)分、便血評(píng)分明顯升高,類(lèi)似人類(lèi)UC臨床特征,說(shuō)明UC小鼠已成模。 2. UC小鼠血漿及結(jié)腸NE表達(dá)明顯增高,且與DAI評(píng)分和組織學(xué)評(píng)分均有相關(guān)性,提示NE可能參與UC的發(fā)病。 3. NE抑制劑干預(yù)UC小鼠,可使便血、體重下降等癥狀改善,使結(jié)腸炎癥好轉(zhuǎn),且該干預(yù)作用呈劑量相關(guān)性,提示早期足量應(yīng)用NE抑制劑,對(duì)UC的臨床過(guò)程有一定的預(yù)防及治療作用。
【圖文】：

糞便性狀：與對(duì)照組比較，UC 組小鼠實(shí)驗(yàn)第 4d（飲 DSS 水 3d）糞便評(píng)分升高（P<0.05），第 5-7d 進(jìn)一步升高（P<0.001），第 8-9d（停用 DS評(píng)分呈下降趨勢(shì)，但仍顯著高于對(duì)照組（P<0.001）；且 UC 組小鼠實(shí)驗(yàn)糞便性狀評(píng)分顯著高于實(shí)驗(yàn)第 5d（P<0.01）（表 1.5，圖 1.2）。表 1.5 小鼠糞便性狀評(píng)分0 1 2 3 4 5 6 7 8 90 0 0.17±0.110.33±0.220.50±0.270.50±0.170.50±0.210.67±0.220.67±0.210.5±00 0 0.550.831.17a2.17b2.83b3.83b3.5b3.1圖 1.1 小鼠體重變化(%)注：aP<0.05 vs 對(duì)照組；bP<0.01 vs 對(duì)照組

3. 便血：與對(duì)照組比較，UC 組便血評(píng)分隨 DSS 飲用時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸升高，在實(shí)驗(yàn)第 6-7d（飲 DSS 水 5d）有顯著性差異（P<0.001），第 8-9d（停用 DS水）便血評(píng)分出現(xiàn)下降趨勢(shì)，，但仍顯著高于對(duì)照組（P<0.001）；且 UC 組小鼠實(shí)驗(yàn)第 9d 便血評(píng)分顯著高于實(shí)驗(yàn)第 5d（P<0.001）（表 1.6，圖 1.3）。表 1.6 小鼠便血評(píng)分0 1 2 3 4 5 6 7 8 9對(duì)照組0 0 0.13±0.120.09±0.210.13±0.170.33±0.220.33±0.120.50±0.250.33±0.200.330.1UC0 0 0.33±0.50±0.67±0.83±1.83±3.17±2.50±2.17圖 1.2 小鼠糞便性狀評(píng)分注：aP<0.05 vs 對(duì)照組；bP<0.001 vs 對(duì)照組；cP<0.01 vs UC 組第 5d
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R574.62

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2697382