發(fā)布時(shí)間：2020-05-23 04:34

【摘要】：目的:本研究通過對(duì)克羅恩病(CD)患者大體標(biāo)本及體外實(shí)驗(yàn)的研究來探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是否可以通過調(diào)整趨化因子的表達(dá)來促進(jìn)CD腸道炎癥的形成。方法:1.收集我院因CD行手術(shù)治療患者的結(jié)腸組織病理標(biāo)本,通過免疫組化檢測(cè)CD患者腸道組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白Grp78和趨化因子IL-8的蛋白表達(dá)情況,并與結(jié)腸癌患者癌旁結(jié)腸標(biāo)本做對(duì)比。2.取HCT116結(jié)腸癌上皮細(xì)胞株進(jìn)行培養(yǎng),用不同濃度內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑衣霉素誘導(dǎo)HCT116細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,或者提前1小時(shí)加入XBP1抑制劑(STF083010)、eIF2α去磷酸化抑制劑(Salubrinal)、p38 MAPK抑制劑(SB203580)分別阻斷IRE1-XBP1、PERK-eIF2α、P38 MAPK信號(hào)通路,然后再加入適宜濃度的衣霉素。3.通過WB檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物Grp78的蛋白表達(dá),通過qRT-PCR檢測(cè)趨化因子Gro-α、IL-8的mRNA表達(dá)變化,通過ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清液中IL-8的蛋白表達(dá)。結(jié)果:1.相比結(jié)腸癌患者癌旁結(jié)腸標(biāo)本,CD患者結(jié)腸黏膜Grp78、IL-8表達(dá)均明顯增加。2.隨著衣霉素濃度的增加,Grp78蛋白表達(dá)增加,趨化因子Gro-α、IL-8的表達(dá)也上調(diào),在5μg/mL時(shí)最明顯。3.阻斷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激下游的IRE1-XBP1、PERK-eIF2α信號(hào)通路對(duì)Grp78的表達(dá)和Gro-α、IL-8的表達(dá)均無影響。4.P38 MAPK抑制劑SB203580可以明顯抑制衣霉素誘導(dǎo)的Gro-α、IL-8mRNA表達(dá)及IL-8蛋白表達(dá)。結(jié)論:1.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和IL-8參與了CD患者腸道炎癥的形成。2.內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可以通過上調(diào)Gro-α、IL-8的表達(dá)來促進(jìn)CD腸道炎癥,機(jī)制可能是通過活化p38 MAPK通路。
【圖文】：

子 IL-8 表達(dá)增加。為了明確內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和 IL-8 是否參與了 CD 腸道炎癥的發(fā)生，我們通過免疫化檢測(cè) CD 手術(shù)患者的腸道標(biāo)本與結(jié)腸癌患者癌旁腸道組織標(biāo)本中 Grp78 和L-8 的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn) Grp78 主要在腸上皮細(xì)胞胞漿中表達(dá)，而 IL-8 在腸皮細(xì)胞和炎癥細(xì)胞胞核中均有表達(dá)。從圖 1 我們可以觀察到相比于癌旁組織標(biāo)，，CD 患者炎癥部位腸組織 Grp78 和 IL-8 染色明顯增強(qiáng)，對(duì)圖片進(jìn)行光密度分，結(jié)果提示 CD 患者腸道炎癥組織 Grp78 和 IL-8 表達(dá)的陽性率更高，兩者之間異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表 1）。這表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、IL-8 的確參與了 CD 的腸道炎癥。表 1 CD 患者腸組織與癌旁組織免疫組化光密度分析結(jié)果（IOD 值）癌旁組織 CD 腸道炎癥組織Grp78 1224±254 8718±329*IL-8 20816±7918 75475±43148*注：與癌旁組織對(duì)比，*P＜0.05AB

導(dǎo) HCT116 發(fā)生了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，并上調(diào) Gro質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和趨化因子 Gro-α、IL-8 的關(guān)系，首先， 24h 來誘導(dǎo) HCT116 細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，WB 結(jié)果顯內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的標(biāo)志蛋白 Grp78 表達(dá)明顯增加（圖 2、IL-8 的 mRNA 水平的表達(dá)也增加（圖 3），相較于空義，且在衣霉素濃度為 5μg/mL 時(shí)表達(dá)最明顯。再胞，反應(yīng) 24h，收集細(xì)胞上清做 ELISA 檢測(cè) IL-8 的霉素促進(jìn)了 IL-8 蛋白水平的表達(dá)（圖 4），對(duì)比空白（P＜0.05）。這些結(jié)果證實(shí)了衣霉素誘導(dǎo) HCT116 發(fā)ro-α、IL-8 的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R574.62

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本文編號(hào)：2677157