【摘要】：背景:乙型肝炎病毒(hepatitis virus,HBV)感染是威脅人類生命建康的全球性問題。全世界約有30億人曾感染過HBV,近3.5億人為慢性HBV感染者。而我國約有9300萬慢性HBV感染者,其中慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者約2000萬例。HBV感染可引起急、慢性肝炎、肝衰竭、肝硬化、肝癌以致死亡。HBV的逆轉(zhuǎn)錄是利用其自身的逆轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行的,但該酶缺乏校正功能,在復(fù)制過程中容易發(fā)生核苷酸序列的錯誤配對,導(dǎo)致同一病毒核酸序列的差異,表現(xiàn)為不同的基因型、亞型。目前根據(jù)全基因組核苷酸序列差異≥8%或S基因序列差異≥4%可將HBV分為A～H 8個基因型;按照全基因組序列差異≥4%而≤8%,將基因型分為不同的基因亞型。近年來研究顯示,HBV基因型和亞型具有明顯的區(qū)域分布差異。在我國大陸地區(qū)流行的HBV基因型有A、B、C、D四種,在北方地區(qū),以C型為主;南方則以B型為主;D型存在多數(shù)地區(qū),尤其多見于部分少數(shù)民族。C型主要有C1和C2亞型,C2亞型主要分布在北方和東南地區(qū),C1亞型主要在南方地區(qū);B型中B2亞型多見。目前認(rèn)為,HBV基因型、亞型可能與其相關(guān)肝病的臨床表現(xiàn)、疾病進(jìn)展、治療、轉(zhuǎn)歸有關(guān)。所以研究地區(qū)基因型、亞型的分布情況及與臨床的關(guān)系有著重要的意義。 目的:了解本組資料HBV基因型、亞型的分布情況及與臨床的關(guān)系,以實現(xiàn)臨床個體化治療及管理。 方法:1、2009年1月-2010年3月于北京地壇醫(yī)院收集的HBV相關(guān)肝病患者118例,入選標(biāo)準(zhǔn):符合2000年《病毒性肝炎防治方案》診斷標(biāo)準(zhǔn)及未經(jīng)過任何抗病毒治療的患者。排除標(biāo)準(zhǔn):合并其他肝炎病毒感染者、其他原因引起的肝臟損害者、免疫功能亢進(jìn)或低下者、血糖及腎功能異常者、妊娠等。采集空腹靜脈血10ml,分離血清后,置-20℃保存?zhèn)溆?檢測ALT、AST、HBVDNA定量及HBeAg定量等。 2、選取Genbank中基因A~D型HBV全基因組序列作為參照序列設(shè)計引物,提取患者血清HBV DNA,經(jīng)巢式PCR (nt-PCR)擴(kuò)增,對瓊脂凝膠電泳結(jié)果陽性的產(chǎn)物用雙脫氧測序法測序。所得序列與GenBanK中S基因區(qū)的64個標(biāo)準(zhǔn)亞型序列用Contig-Express、BioEdit進(jìn)行編輯比對后,通過MEGA4軟件構(gòu)建亞型進(jìn)化樹。 3、統(tǒng)計學(xué)方法分析不同基因型、亞型的臨床結(jié)局。 結(jié)果:1.本組118例患者中有81例C基因型(68.64%);34例D基因型(28.81%);3例B基因型(2.54%);C基因型發(fā)現(xiàn)C1和C2亞型,D基因型發(fā)現(xiàn)D1和D4亞型,B型發(fā)現(xiàn)B1和B4亞型,以C2(64.41%)和D4(27.97%)亞型為主。2.C基因型尤以C2亞型在原發(fā)性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)組的患者占有較高的比例(90.00%),D基因型尤以D4亞型在肝硬化(1iver cirrhosis,LC)患者中的比例較高(30.00%),而3例B基因型僅在CHB、LC患者中發(fā)現(xiàn),但在CHB、LC、肝衰竭(hepatic failure,HF)、HCC各組患者中的基因型及亞型分布無顯著差異(P0.05)。3.C基因型在年齡、性別、ALT、HBeAg陽性率、HBV DNA定量較D型高,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。以上各臨床指標(biāo)在C2與D4亞型中也無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。 結(jié)論:1.本組資料基因型以C型為主,其次是D、B型,未發(fā)現(xiàn)其他基因型。2.亞型有B1、B4、C1、C2、D1、D4,其中以C2亞型為主,D4亞型次之;3.CHB、LC、HF、HCC患者之間的各基因型、亞型無明顯區(qū)別;4.C和D基因型、C2和D4亞型患者間的性別、年齡、血清學(xué)及病毒學(xué)指標(biāo)無明顯差異;5.對于本組資料是否具有其他基因型、亞型,及其與相關(guān)性肝病臨床表現(xiàn)、病程進(jìn)展、治療、預(yù)后是否有相關(guān)性、如何相關(guān),需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量深入研究。
【圖文】：

山西醫(yī)科③ 取第二輪 PCR 產(chǎn)物 3μl 和 10×加樣緩沖液 1μl，用移液器混勻后慢加同時加入 DNA 分子量標(biāo)準(zhǔn)物。④ 關(guān)上電泳槽蓋，接好電極插頭，給予 100V 電壓進(jìn)行電泳，當(dāng)加樣緩藍(lán)和二甲苯氰遷移至足夠分離 DNA 片段的距離時停止電泳，取出凝膠在凝統(tǒng)上觀察照相。2.3.3 PCR 產(chǎn)物的純化與測序未經(jīng)純化的第二輪 PCR 產(chǎn)物由北京奧科生物科技有限公司進(jìn)行純化、選擇 Xnp2，，XAnp2 為備用測序引物，測序儀型號為 ABI3730xl。2.3.4 患者基因型檢測因 PCR 產(chǎn)物包括 HBV RT 區(qū) A~D 保守序列以及 HBsAg 編碼序列，因此入美國國立生物技術(shù)信息中心（NCBI）的 HBV 基因型分析軟件（見圖 1），比對得出相應(yīng) HBV 基因型[22]。

BioEdit序列比對軟件
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R512.62

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃月華;梁敏鋒;楊海紅;區(qū)映研;岑均華;周彬;;廣東地區(qū)乙肝病毒C基因亞型的分布與臨床[J];廣東醫(yī)學(xué);2008年12期

2 李曉東;李慶虹;李進(jìn);周渝霞;郝玉清;戴久增;李樂;姚增濤;張玲霞;徐東平;;華北地區(qū)HBV基因亞型特點及其與核苷(酸)類抗HBV藥物耐藥突變的關(guān)系[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2010年06期

3 童巧霞;吳艷艷;羅端德;;Distribution of Hepatitis B Virus Genotypes and Its Clinical Significance in Hubei Province, China[J];Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences);2007年03期

4 董梅;乙肝病毒基因型的研究進(jìn)展及臨床意義[J];武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2005年04期

5 薛瑞霞;張繚云;楊松;王琦;邢卉春;謝雯;郭江;成軍;;恩替卡韋治療失敗的慢性乙型肝炎患者耐藥分析20例[J];世界華人消化雜志;2009年12期

6 許軍,王齊欣,蔣棟,陳紅松,魏來,王宇,楊柳明,趙延龍;乙型肝炎病毒基因型與病情輕重的關(guān)系[J];中華肝臟病雜志;2003年01期

7 李雅娟,莊輝,李杰,董慶鳴,陳雅潔,�？∑�,馬為民,趙偉,趙保安,鐘金群;乙型肝炎病毒感染者病毒基因型和亞型分布及其臨床意義[J];中華肝臟病雜志;2005年10期

8 閆杰,何忠平,莊輝,董慶鳴,宋淑靜,朱林,王小紅;中國北方5城市慢性乙型肝炎患者中SEN病毒檢測[J];中華流行病學(xué)雜志;2003年01期

9 胡盈瑩,江家驥,歐文湖,林國賢,蘇智軍,劉家俊,李勤光,姚履楓,林彩文,李丹,陳怡;福建省部分地區(qū)乙型肝炎病毒基因型分布及其臨床意義[J];中華流行病學(xué)雜志;2004年03期

10 劉映霞;位興輝;羅志雄;李紅梅;;乙型肝炎患者HBV基因型與核苷(酸)類似物耐藥變異的關(guān)系[J];中華實驗和臨床感染病雜志(電子版);2007年02期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 周霞;HBV復(fù)制水平及基因型、亞型對HBV相關(guān)性肝病發(fā)病的影響[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

本文編號：2675625