【摘要】：肝纖維化是一常見病，致病率和病死率高。慢性肝病如寄生蟲性(血吸蟲、華支睪吸蟲感染)、慢性病毒性(HCV、HBV感染)、免疫性(自體免疫性肝損傷)、毒物損傷性肝病等均可導(dǎo)致肝纖維化的形成，進(jìn)一步可發(fā)展為肝硬化甚至肝癌。肝纖維化的病理特征為肝內(nèi)過量的細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)沉積。到目前為止，臨床尚無確實(shí)有效的治療方式。銀杏葉提取物(extract of Ginkgo biloba，EGB)由銀杏樹的綠葉中提取，其具有類似SOD的活性和自由基清除作用，本研究的目的是了解EGB在大鼠CCl_4所誘導(dǎo)肝纖維化形成和恢復(fù)過程中的作用及其可能的機(jī)制。 研究分為兩部分，第一部分研究EGB對(duì)大鼠CCl_4肝纖維化形成的抑制作用及其機(jī)制。將40只大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(N組)、EGB正常對(duì)照組(E組)、造模組(C組)和EGB預(yù)防組(CE組)。四組大鼠分別以生理鹽水、EGB200mg·kg~(-1)、生理鹽水或EGB 200mg·kg~(-1)灌胃，1次·天~(-1)；同時(shí)分別以礦物油、礦物油、CCl_4+礦物油(1：1)或CCl_4+礦物油(1：1)0.15ml·只~(-1)腹腔注射，2次·周~(-1)。于第8周末處死大鼠，應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀檢測血清ALT、AST、Alb、TP和Tbil，觀察肝功能變化；肝組織HE染色、Masson染色和網(wǎng)狀纖維染色，觀察肝組織病理學(xué)變化；檢測肝組織中MDA含量的變化；免疫組化方法檢測肝組織αSMA蛋白表達(dá)的變化；RT-PCR法檢測肝組織中MMP-13、-2、TIMP-1和TIMP-2基因表達(dá)的變化。 第二部分研究EGB對(duì)大鼠肝纖維化逆轉(zhuǎn)的促進(jìn)作用及其機(jī)制。大鼠CCl_4腹腔注射8周后，將C組大鼠處死，經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為肝纖維化形成，將剩余18只大鼠隨機(jī)分為2組：EGB治療組(Y組)和自然恢復(fù)組(Z組)，分別以EGB 200mg·kg~(-1)和等體積生理鹽水灌胃，1次·天~(-1)，共2周，于實(shí)驗(yàn)?zāi)┨幩来笫�，同樣進(jìn)行肝臟病理學(xué)研究、肝功能檢測、肝組織MDA含量檢測和αSMA蛋白表達(dá)的免疫組化研究及肝組織MMP-13、-2、TIMP-1和TIMP-2基因表達(dá)的研究。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，C組肝纖維化形成，與N組相比較，C組大鼠肝纖維化程度明顯 增加(，6.18，尸0.01)，肝組織中膠原纖維和網(wǎng)狀纖維含量明顯增加(拼25.H 和27.14，P0.001)，MDA含量明顯增加(片9.64，P0.001)，，aSMA蛋白陽性 染色面積明顯增加(t=4‘94，P0.001)，MMP一2、TIMP一l和TIMP一2基因表達(dá)明 顯增加(r分別為29.37，27.56，25.08，P0.001)，血清ALT、AST活性和Tbil 水平明顯升高(t分別為6.82、7.14和6.06，尸0.001)，血清Alb、TP含量則明 顯降低(t分別為1221和1 3.79，尸0.001)。相對(duì)于C組，CE組大鼠肝功能改 善(ALT:卜3 .89，AST:卜5.06;Thil:拼4.22，TP:拼n .01，Alb:片7.04，均 為尸0.001)，肝纖維化程度降低(u二3.55，p0.01)，肝組織中膠原纖維和網(wǎng)狀纖 維沉積明顯減少(拼9.85和18.94，P0.001)，MDA含量降低(拼3.71，P 0.005)， aSMA蛋白陽性面積明顯減少(拼6.67，P0.001)，MMP一2、TIMP一l和TIMP一2 基因表達(dá)減少(t為14.58，11.29，7.52，P0001)，但CE組各指標(biāo)與N組相比 較仍有顯著性差異(ALT:戶3.27，P0.005;AST:卜2.04，Alb:拼2.59，Tbil: t=2 .50，P0.05;TP:t=4.04，P0.001;肝纖維化分級(jí):u=3.95，P0.01;膠原 纖維沉積:t=16.79，P0.001;MDA:t=6.67.P0.001;aSMA:拼3.02，P0.005; MMP一2:t= 18，72，TIMP一l:卜26.22，TIMP一2:t=13.40，P0.001):網(wǎng)狀纖維沉 積與N組相比較，無顯著性差異(片1.71，P.05)。E組和N組各指標(biāo)無明顯 差異。各組肝組織中未見MMP一13基因表達(dá)。 Z組大鼠肝纖維化程度相對(duì)于C組明顯降低(u=3.28，P0.01)，肝組織中膠 原纖維和網(wǎng)狀纖維含量減少(t分別為2.99，3.23，P0.005)，MDA含量下降 (拼2.37，P0.05)，aSMA陽性面積無明顯差異(t=1 .40，P.05)，MMP一13基 因表達(dá)明顯增加(t=30.75，尸0.001)，而TIMP一1和TIMP一2、MMP一2基因表達(dá) 明顯減少(t為11.31和15.10，33.33，P0，001)，肝功能部分改善(ALT:戶1.50， 尸 .05:AST:拼1 .67，尸0.05;Tbil:戶3.54，P0.005;TP:片7.66，P0‘001: Alb:拼5.28，尸0.001)。Y組大鼠肝功能正常，與z組比較，Y組肝纖維化程度 明顯降低(好3.54，P0.01)，膠原纖維和網(wǎng)狀纖維沉積進(jìn)一步減少(t分別為7.14 和12.17，P0.001)，MDA含量明顯減少(拼5.93，P0.001)，aSMA蛋白陽性 面積明顯減少(戶1 .83，尸0 .05)，肝組織MMP一13基因表達(dá)明顯增加(拼8.46， P0.001)，TIMP一1和TIMP一2、MMP一2基因表達(dá)迅速減少(t為12.63，22.46 和5 .76，P0.001)。 以上結(jié)果提示:EGB有防治肝纖維化的作用，EGB通過抑制氧化應(yīng)激而抑 制HSC活化，降低肝組織MMP一2、TIMP一1、一2的表達(dá)，從而抑制肝纖維化的 形成。EGB促進(jìn)HSC凋亡/促進(jìn)HSC向靜止?fàn)顟B(tài)轉(zhuǎn)變，增加肝組織MMP一13表 達(dá)，抑制護(hù)r1MP一1、一2的表達(dá)，促進(jìn)肝纖維化的逆轉(zhuǎn)。
【圖文】：

總RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳顯示55、185、285三條RNA電泳帶

肝組織p一actin基因F門二PCR擴(kuò)增產(chǎn)物(556bp)
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2658152