【摘要】：MicroRNAs(miRNAs)是一類22～25核苷酸長度的內(nèi)源性非編碼小RNA,它可通過與靶mRNA3'非編碼區(qū)(3'untranslatedregion,3'UTR)互補配對,降解或抑制靶mRNA,對調(diào)控基因表達進行轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。miRNAs通過轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)基因表達,參與細胞間信號傳遞、細胞增殖、生長、分化、凋亡以及細胞代謝等多種生物過程。研究發(fā)現(xiàn),miRNAs通過影響細胞葡萄糖轉(zhuǎn)運體的表達水平、胞內(nèi)葡糖代謝效率、胰島β細胞的功能等過程進而影響機體糖代謝水平。miRNAs還通過與相關(guān)脂代謝調(diào)節(jié)基因3'UTR互補結(jié)合調(diào)控基因表達,對脂代謝進行調(diào)控。硫氧還蛋白相互作用蛋白(thioredoxin-interacting protein,TXNIP),又稱維生素 D3 上調(diào)蛋白 1(vitamin D3 up-regulated protein 1,VDUP1),硫氧還蛋白結(jié)合蛋白 2(thioredoxin binding protein 2,TBP2),分子量約 50 kDa。TXNIP 具有調(diào)節(jié)細胞內(nèi)氧化還原狀態(tài)、抑制細胞增殖,促凋亡和衰老功能。TXNIP基因缺失小鼠表現(xiàn)出脂質(zhì)代謝紊亂,具有高脂血癥和肝脂肪變性特征。有研究表明,TXNIP對肝脂質(zhì)代謝中脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白 1c(sterol regulatory element binding protein1c,SREBP1c)、過氧化物酶體增殖劑激活受體(peroxisome proliferators-activated receptors,PPARs)等基因發(fā)揮了關(guān)鍵的調(diào)控作用。利用miRNAs預(yù)測網(wǎng)站進行生物信息學分析得出,TXNIP可能是miR-302a靶基因;我們選取miR-302a和TXNIP為研究靶點,研究miR-302a可能通過抑制TXNIP表達,參與肝脂質(zhì)代謝。首先,我們證實了 TXNIP是miR-302a的靶基因;其次,通過體內(nèi)和體外實驗,在非酒精性脂肪肝細胞和動物模型中,證實了 miR-302a可通過影響TXNIP的表達調(diào)控肝脂質(zhì)代謝。利用PCR、western blot等相關(guān)技術(shù)檢測TXNIP及與其相關(guān)如FASN、PPARα、SREBP1c、磷酸烯醇式丙酮酸竣激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinade,PEPCK)等脂代謝調(diào)控基因的表達。此外,我們還利用油紅染色以及HE染色技術(shù)檢測了肝臟/肝細胞中脂肪堆積程度及組織形態(tài)變化。miR-302a過表達會導(dǎo)致TXNIP表達水平下降,PPARα和PEPCK表達也隨之下降,SREBP1c和FASN表達增加,加劇肝臟/肝細胞脂質(zhì)積累,干擾了正常脂代謝的進行。敲降miR-302a后,TXNIP表達升高,PPARα、PEPCK表達也隨之增加,SREBP1c和FASN表達減少,促進肝臟/肝細胞脂質(zhì)代謝,延緩了脂肪肝的進程�？偨Y(jié):miR-302a對TXNIP具有轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用,并可通過TXNIP影響與其相關(guān)脂代謝調(diào)控因子調(diào)節(jié)肝臟/肝細胞脂質(zhì)代謝,為今后脂代謝疾病的治療提供可能靶點。
【圖文】：

圖２．１－２熒光素酶報告載體構(gòu)建示意圖逡逑Ｆｉｇ邋２．１－２邋Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ邋ｒｅｐｏｒｔｅｒ邋ｖｅｃｔｏｒ邋ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ逡逑（４）根據(jù)人和小鼠ｍｉＲ－３０２ａ的前體序列和成熟序列（圖２．１－３），分別設(shè)逡逑構(gòu)建、合成ｍｉＲ－３０２ａ的ｍｉｍｉｃ和抑制子（反義寡核苷酸探針）。通過脂質(zhì)體逡逑染將構(gòu)建的ｍｉＲ－３０２ａ邋ｍｉｍｉｃ、抑制子分別轉(zhuǎn)染正常ＨｅｐＧ２細胞和脂肪變性肝逡逑胞模型４８小時后，，應(yīng)用ｑＲＴ－ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔｔｉｎｇ在ＲＮＡ和蛋白水平分別逡逑量檢測其邋ｍｉＲ－３０２ａ、ＴＸＮＩＰ邋以及邋ＰＥＰＣＫ、ＦＡＳＮ、ＳＲＥＢＰｌｃ、ＰＰＡＲａ邋表達量逡逑

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【學位授予單位】：昆明理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R575

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Jun Wei Lim;John Dillon;Michael Miller;;Proteomic and genomic studies of non-alcoholic fatty liver disease-clues in the pathogenesis[J];World Journal of Gastroenterology;2014年26期

本文編號：2577081