【摘要】：目的： 針對重要的常見致腹瀉病原,包括沙門菌、志賀菌、致病性弧菌(主要包括霍亂弧菌和副溶血性弧菌)、致瀉性大腸桿菌(EPEC、ETEC、EIEC、EHEC、EAEC),諾如病毒、札如病毒、輪狀病毒、腸道腺病毒和人星狀病毒,建立整合PCR作為初篩技術的腹瀉病原體快速檢測流程,評估該流程的實際應用價值。初步掌握監(jiān)測點腹瀉癥候群病原譜特征,了解所分離病原體的血清分型、毒力基因特征和耐藥情況。 方法： 1、選擇無錫市7家哨點醫(yī)院作為監(jiān)測點,收集腹瀉病例基本信息,采集病例糞便標本,用傳統(tǒng)方法對致瀉性大腸桿菌、志賀菌、沙門菌和致病性弧菌(主要包括霍亂弧菌和副溶血性弧菌)進行分離培養(yǎng)和鑒定,對分離到的菌株進行血清分型、毒力基因鑒定和藥敏實驗。 2、對糞便標本提取總核酸(包括DNA和RNA),對細菌分離培養(yǎng)不同環(huán)節(jié)提取核酸,包括增菌液核酸和EMB平板的菌苔核酸,對糞便核酸和中間核酸進行不同目標病原檢測。多重常規(guī)PCR檢測致瀉大腸桿菌的靶基因,多重熒光PCR檢測沙門菌、志賀菌、副溶血性弧菌和霍亂弧菌的靶基因,單重熒光PCR技術檢測標本中的目標病毒。 結果： 1、2013年4月至12月共采集334例腹瀉病例糞便標本,常規(guī)培養(yǎng)法分離到目標菌30株,總陽性率為9.0%。其中沙門菌18株,致瀉性大腸桿菌6株,志賀菌、霍亂弧菌和副溶血性弧菌各2株。 2、PCR檢測結果：①致瀉性大腸桿菌：糞便標本中檢測到18份陽性,經測序證實13份含相應的靶序列,5份為非特異性擴增,其中2份與常規(guī)培養(yǎng)結果一致；平板菌苔中21份陽性,經測序證實均含靶序列,5份與常規(guī)培養(yǎng)結果一致。②志賀菌：糞便標本中檢出8份陽性,經測序證實均含志賀菌靶序列,其中2份與常規(guī)培養(yǎng)結果一致。③沙門菌：糞便中檢出1份陽性；增菌液中22份陽性,經測序證實均含靶序列,22份陽性中與常規(guī)培養(yǎng)結果一致的為18份。④副溶血性弧菌：糞便和增菌液中均檢出2份陽性,且與分離培養(yǎng)結果一致。⑤霍亂弧菌：糞便中檢出1份陽性；增菌液中2份陽性,與分離培養(yǎng)結果一致。 3、目標病毒核酸陽性83份,總檢測陽性率24.9%。陽性率由高到低依次為NV11.7%、 RV8.4%、EADV2.1%、ASTV1.5%、SPAV1.2%.這些病毒感染有明顯的季節(jié)特征,冬春季為發(fā)病高峰。 4、沙門菌血清型呈現多樣性,以E群為主,對多種抗生素顯示出不同程度的耐藥。致瀉性大腸桿菌對萘啶酸和甲氧芐啶/磺胺甲VA唑的耐藥程度較高。 結論： 1、基于PCR作為初篩技術的腹瀉病原體檢測流程用于腹瀉癥候群病原體監(jiān)測快速、準確、高效。新的篩查技術方案為：①致瀉性大腸桿菌：糞便標本接種腸道菌分離平板,用多重PCR檢測第一區(qū)菌苔,陽性標本則從平板上挑取單菌落進行相應毒力基因鑒定。②志賀菌：直接對標本進行熒光PCR檢測,陽性標本進行進一步分離培養(yǎng)。③沙門菌、霍亂弧菌和副溶血性弧菌：選擇性增菌,對增菌液采用熒光PCR檢測,陽性標本接種相應選擇性平板進行進一步分離培養(yǎng)。 2、沙門菌、致瀉性大腸桿菌、諾如病毒和輪狀病毒是當年主要的致腹瀉病原。夏季以細菌性腹瀉為主,冬春季以病毒性腹瀉為主。
【學位授予單位】：中國疾病預防控制中心
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R440;R574.62

【參考文獻】

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本文編號：2568068