【摘要】：目的探究幽門螺桿菌(HP)感染對小鼠十二指腸上皮細(xì)胞碳酸氫鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的影響。方法 C57小鼠隨機(jī)分為四組,三組分別給予HP菌株SS1、NCTC11637、NCTC11639感染,一組僅給予同等量的磷酸鹽緩沖液(PBS)灌胃(對照組),2 w后收集組織。體外培養(yǎng)十二指腸上皮細(xì)胞,與HP菌株共培養(yǎng),其中對照組給予等量PBS干預(yù),收集細(xì)胞。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及Western印跡檢測組織及細(xì)胞中碳酸氫鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果 HP感染小鼠后,由吉姆薩染色鏡檢見,感染后可見大量紫藍(lán)色小體,呈逗點(diǎn)狀、短棒狀;細(xì)胞實(shí)驗(yàn):HP菌株NCTC11637與十二指腸上皮細(xì)胞共培養(yǎng)后應(yīng)用RT-PCR擴(kuò)增HP16srRNA,小鼠及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)均目的基因?yàn)閱我粩U(kuò)增,擴(kuò)增良好。小鼠及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)均3種HP菌種囊性纖維跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)因子(CFTR)、離子交換體(SLC)26A3及SLC26A6感染2 w后,碳酸氫鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白mRNA及蛋白表達(dá)顯著低于對照組(P0.05)。結(jié)論從體內(nèi)到體外,HP可通過調(diào)控碳酸氫鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白含量來干預(yù)疾病的進(jìn)展。
【圖文】：

ＲM)溶液中，充分搖勻。取組織碎片，加入含酶的NＲM溶液，37℃水浴，終止消化后離心取細(xì)胞沉淀，應(yīng)用含20ng/ml的表皮生長因子及0.2U/ml的胰島素的DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)。選取HP菌株培養(yǎng)72h收獲，刮取菌落，混于滅菌PBS混勻，加入十二指腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)液中，按細(xì)菌細(xì)菌和細(xì)胞數(shù)量比為的比為100∶1培養(yǎng)，混合培養(yǎng)24h后收集細(xì)胞備用。其中對照組予等量PBS溶液干預(yù)。1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1小鼠HP感染的鑒定胃竇黏膜切片，由吉姆薩染色鏡檢見，HP感染后可見大量紫藍(lán)色小體，呈逗點(diǎn)狀、短棒狀，見圖1;取胃竇黏膜組織，應(yīng)用ＲT-PCＲ擴(kuò)增HP16srＲNA，可見，目的基因?yàn)閱我粩U(kuò)增，擴(kuò)增良好，退火溫度為60℃，其中擴(kuò)增曲線、溶解曲線及溶解曲線峰圖見圖2。圖1小鼠胃竇黏膜HP感染鑒定2.2HP感染對小鼠碳酸氫鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白mＲNA的影響應(yīng)用ＲT-PCＲ檢測HP感染2w后CFTＲ、SLC26A3、SLC26A6的表達(dá)變化。CFTＲ、SLC26A3及SLC26A6均為單一擴(kuò)增，擴(kuò)增良好，且與對照組相比，3種菌株CFTＲ、SLC26A3及SLC26A6mＲNA表達(dá)顯著低于對照組(均P＜0.05)，見表2，圖3。2.3HP感染對小鼠碳酸氫鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的影響應(yīng)用Western印跡檢測HP感染2w后CFTＲ、SLC26A3、SLC26A6的表達(dá)變化。與對照組相比，3種菌株CFTＲ、SLC26A3及SLC26A6蛋白表達(dá)顯著低于對照組(P＜0.05)，見圖4。鄧時(shí)莉等幽門螺桿菌感染對十二指腸黏膜上皮細(xì)胞碳酸氫鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)的影響第9期·2087·

圖2小鼠16srＲNA的擴(kuò)增曲線、溶解曲線及溶解曲線峰圖2.4HP感染小鼠模型定值密度各型菌株感染小鼠模型，其定值密度無明顯差異(P＞0.05)，見表3。因此隨機(jī)選取標(biāo)準(zhǔn)菌株NCTC11637進(jìn)行后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。2.5原代培養(yǎng)的十二指腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)正常培養(yǎng)的十二指腸上皮細(xì)胞，以取出細(xì)胞開始培養(yǎng)為0h，24～48h細(xì)胞開始貼壁，7～8d細(xì)胞開始增殖，10～14d時(shí)細(xì)胞開始融合，見圖5。取十二指腸上皮細(xì)胞，應(yīng)用ＲT-PCＲ擴(kuò)增HP16srＲNA，可見，目的基因?yàn)閱我粩U(kuò)增，擴(kuò)增良好，退火溫度為60℃，其中擴(kuò)增曲線，溶解曲線及溶解曲線峰圖見圖6。2.6HP感染對十二指腸上皮細(xì)胞碳酸氫鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白mＲNA的影響應(yīng)用ＲT-PCＲ檢測HP與十二指腸上皮細(xì)胞共培養(yǎng)24h后CFTＲ、SLC26A3、SLC26A6mＲNA的表達(dá)變化。與對照組相比，NCTC11637菌株CFTＲ、SLC26A3及SLC26A6mＲNA表達(dá)顯著低于對照組(P＜0.05)，見表4。2.7HP感染對十二指腸上皮細(xì)胞共培養(yǎng)24h后碳酸氫鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的影響與對照組相比，3種菌株CFTＲ、SLC26A3及SLC26A6蛋白表達(dá)顯著低于對照組(均P＜0.05)，，見圖7。表2HP感染小鼠后2w碳酸氫鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白mＲNA的表達(dá)水平(x±s，n=12)指標(biāo)CFTＲSLC26A3SLC26A6對照組2.79±0.742.29±0.711.36±0.63NCTC116391.61±0.891)0.59±0.311)0.51±0.221)NCTC116371.69±0.591)0.99±0.311)1.01±0.211)標(biāo)準(zhǔn)株SS11.11±0.791)0.41±0.301)0.61±0.111)與對照組比較:1)P＜0.05;表4同表3各菌株HP感染小鼠定值密度分析〔n(%)，n=12〕菌株輕度中度重度標(biāo)準(zhǔn)株SS17(58.3)3(25.0)2(16.7)NCTC116376(50.0)4(33.3)2(16.7)NCTC116397(58.3)2(16.7)3(25.0)圖3HP感染小鼠后2wCFTＲ、SLC26A3、SLC26A6mＲNA的表達(dá)水平·2088·中國老年學(xué)雜志2017年5月第37卷

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1 周春浩;粘液-碳酸氫鹽屏障[J];國外醫(yī)學(xué)(消化系疾病分冊);1988年03期

本文編號：2554481