【摘要】：目的:研究大蒜素對大鼠肝星狀細(xì)胞增殖和Bcl-2蛋白表達的影響,初步探討大蒜素誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞凋亡相關(guān)機制。方法:大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6生長于體積分?jǐn)?shù)為10%胎牛血清及1×105 IU/L青霉素、100 mg/L鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中,在37℃、飽和濕度、5%CO2孵箱中常規(guī)培養(yǎng)。以25、50、100、200μmol/L大蒜素分別作用于HSC-T6細(xì)胞0、6、12、24和48 h后,利用倒置相差顯微鏡及透射電鏡觀察HSC-T6細(xì)胞數(shù)量及形態(tài)學(xué)變化;MTS比色法檢測細(xì)胞存活率;qRT-PCR檢測HSC-T6細(xì)胞Bcl-2 mRNA相對表達量;Western blotting檢測HSC-T6細(xì)胞中Bcl-2、Bax以及Cleaved caspase-3蛋白的相對表達水平。用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD法,計量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±SD)表示,以P0.05或P0.01為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1.大蒜素對HSC-T6細(xì)胞形態(tài)的影響:不同濃度大蒜素作用于HSC-T6細(xì)胞48 h后,對照組細(xì)胞密度較大,形態(tài)呈長梭形;大蒜素組隨著藥物濃度的升高,細(xì)胞密度和體積逐漸變小,多角偽足減少甚至消失,形態(tài)呈橢圓形。100μmol/L大蒜素作用于HSC-T6細(xì)胞一定時間后,隨著作用時間的延長,細(xì)胞數(shù)目逐漸變少,體積變小,多角偽足減少。2.大蒜素對細(xì)胞生長的抑制作用:不同濃度大蒜素作用于HSC-T6細(xì)胞不同的時間后,細(xì)胞存活率結(jié)果提示大蒜素對HSC-T6的增殖具有抑制作用,且作用呈劑量和時間依賴性。25μmol/L大蒜素分別作用于HSC-T6細(xì)胞12、24和48 h后,細(xì)胞存活率明顯下降(P0.01);50、100、200μmol/L大蒜素分別作用于HSC-T6細(xì)胞6、12、24和48 h后,細(xì)胞存活率明顯下降(P0.05或P0.01)。3.細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化:100μmol/L大蒜素作用于HSC-T6細(xì)胞12 h后,對照組細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,細(xì)胞核中染色質(zhì)分布均勻;大蒜素組細(xì)胞核固縮,核染色質(zhì)濃縮凝集成團塊狀,可見核碎片和凋亡小體形成。4.大蒜素對HSC-T6細(xì)胞Bcl-2基因表達的影響:不同濃度大蒜素作用于HSC-T6細(xì)胞48 h后,隨著藥物濃度的升高,Bcl-2基因表達逐漸下調(diào)。與對照組相比,各大蒜素組Bcl-2基因表達均明顯下調(diào)(P0.01)。5.大蒜素對HSC-T6細(xì)胞Bcl-2、Bax和Cleaved caspase-3蛋白表達的影響:不同濃度大蒜素作用于HSC-T6細(xì)胞48 h后,隨著藥物濃度的升高,Bcl-2蛋白表達逐漸下調(diào),而Bax和Cleaved caspase-3蛋白表達逐漸上調(diào),Bax/Bcl-2比值逐漸升高。大蒜素濃度為25、50、100和200μmol/L,隨著藥物濃度的升高,Bax以及Cleaved caspase-3表達上調(diào)(P0.05或P0.01);大蒜素濃度為50、100和200μmol/L,隨著藥物濃度的升高,Bcl-2蛋白表達下調(diào),Bax/Bcl-2的比值升高(P0.05或P0.01)。結(jié)論:1.大蒜素對HSC-T6細(xì)胞增殖具有抑制作用,且作用具有劑量與時間依賴性。2.大蒜素可誘導(dǎo)HSC-T6凋亡,其機制可能與下調(diào)Bcl-2蛋白表達,上調(diào)Bax以及Cleaved caspase-3蛋白表達有關(guān)。
【圖文】：

大蒜素對大鼠肝星狀細(xì)胞 Bcl-2 蛋白表達的影響第三章 結(jié) 果(Results)ATS 對 HSC-T6 細(xì)胞數(shù)量和形態(tài)學(xué)的影響倒置相差顯微鏡觀察結(jié)果顯示，不同濃度 DATS 作用 HSC-T6 細(xì)胞 48 h 后，可見細(xì)胞密度較大，細(xì)胞貼壁生長，形態(tài)呈長梭形，有多角偽足。在 DATS 組，可見物 DATS 濃度升高，HSC-T6 細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，DATS 濃度為 100 μmol/L 和 2l/L 時可見細(xì)胞數(shù)量較對照組明顯減少，細(xì)胞體積變小，呈橢圓形，多角偽足減少失，見圖 1。100 μmol/L DATS 分別作用于 HSC-T6 細(xì)胞 6、12、24 和 48 h 后，示在作用時間為 6 h 時，細(xì)胞數(shù)目較少，形態(tài)呈長橢圓形，細(xì)胞懸浮在培養(yǎng)基中藥物 DATS 作用時間的延長，細(xì)胞貼壁生長，形態(tài)呈長梭形或星形，有多角偽足溶劑對照組細(xì)胞培育 48 h 后，細(xì)胞呈長梭形，融合度為 100%。DATS 100 μmol胞數(shù)目較溶劑對照組明顯減少，，細(xì)胞增殖抑制作用較明顯，見圖 2。

圖 2 100 μmol/L DATS 作用不同時間后，HSC-T6 細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化（×200）A：溶劑對照組 48 h；B：DATS100 μmol/L 6 h；C：DATS100 μmol/L 12 h；D：DATS100 μmol/L 24 h；E：DATS100 μmol/L 48 hATS 對 HSC-T6 細(xì)胞的增殖抑制作用MTS 比色法檢測結(jié)果顯示，DATS 對 HSC-T6 的增殖具有抑制作用。DATS 25 μm于 HSC-T6 12 h 即顯示出明顯的細(xì)胞增殖抑制作用（P<0.01），且隨著 DATS 作的延長，細(xì)胞存活率逐漸降低。DATS 50 μmol/L、100 μmol/L 和 200 μmol/L 分別 HSC-T6 細(xì)胞 6、12、24 和 48 h 均顯示出明顯的增殖抑制作用（P<0.05 或 P<0.0 DATS 濃度的增高以及作用時間的延長，HSC-T6 細(xì)胞的存活率逐漸降低，DATSC-T6 細(xì)胞的增殖抑制作用逐漸增強。見圖 3、表 1。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R575

【參考文獻】

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本文編號：2548013